多胺氧化酶(PAO)检测试剂盒 ; 50管/48样
测定意义：
多胺氧化酶是催化生物体内多胺氧化的关键酶，通过调节体内多胺水平和生成物的浓度，参与各种植物体对逆境胁迫的反应和生长发育过程。
测定原理：
PAO催化多胺氧化产生过氧化氢，在过氧化氢酶存在的条件下与底物显色，在550nm下有特征吸收峰，通过测定吸光值增加速率来反映PAO活性。
需自备的仪器和用品：
分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体100mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：液体6mL×1瓶，4℃保存；
试剂三：液体3mL×1瓶，4℃保存；
试剂四：液体3mL×1瓶，4℃保存。
粗酶液提取：
1、组织：按照组织质量(g)：试剂一体积(mL)为 1 ：5~10的比例(建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一)进行冰浴匀浆，然后 10000g ，4℃离心 20min，取上清，置冰上待测。
2、细菌、真菌：按照细胞数量(10⁴)：试剂一体积(mL)为500~1000 ：1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一)，冰浴超声波破碎细胞(功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min)；然后10000g，4℃, 离心10min，取上清置于冰上待测。
3、血清等液体：直接测定。
操作步骤：
1、分光光度计预热30min，调节波长至734nm。
2、工作液的配置：临用前取试剂二一瓶，加入25mL试剂一，震荡混匀20min后，静置，取上清使用。(注意，现配现用)
3、操作表(在EP管中反应)
测定步骤：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至550nm，蒸馏水调零。
2、样本测定
试剂名称(µL) | 测定管 |
试剂一 | 700 |
试剂二 | 100 |
试剂三 | 50 |
样本 | 100 |
试剂四 | 50 |
迅速混匀，于550nm下测定初始吸光值A1与30min 后吸光值A2。ΔA=A2-A1。 |
PAO活性计算：
(1) 按样本蛋白浓度计算：
单位定义：
每mg组织蛋白在每mL反应体系中每分钟A550变化0.002为一个酶活力单位。
PAO(U/mg prot)=ΔA×V反总÷(V 样×Cpr)÷0.002÷T =166.67×ΔA÷Cpr
(2) 按样本鲜重计算：
单位定义：
每g组织在每mL反应体系中每分钟A550变化0.002为一个酶活力单位。
PAO(U/g鲜重)=ΔA×V反总÷(W×V样÷V样总)÷0.002÷T=166.67×ΔA÷W
(3) 按细菌或细胞密度计算：
单位定义：
每1万个细菌或细胞在每mL反应体系中每分钟A550变化0.002为一个酶活力单位。 PAO(U/10⁴cell)=ΔA×V 反总÷(500×V 样÷V
样总)÷0.002÷T=0.333×ΔA
(4) 按液体体积计算：
单位的定义：
每mL液体样本在每mL反应体系中每分钟A550变化0.002为一个酶活力单位。
PAO(U/mL)=ΔA×V 反总÷V 样÷0.002÷T =166.67×ΔA V 反总：反应体系总体积，1×10-³L；V 样：加入样本体积，0.1mL；
V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，30min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞
总数，500万。
