肌酐(Cr)检测试剂盒/48样
测定意义：
肌酐 (Creatinine,CRE) 是肌肉代谢的产物，主要通过肾小球滤过排出体外。在正常情况 下，体内肌酐的含量基本稳定。血液中的肌酐浓度可作为检测肾小球滤过功能的指标之一。本试剂盒利用肌酐酶特异作用于肌酐生成肌酸，肌酸在肌酸酶和肌氨酸氧化酶的相继作用下 生成过氧化氢，过氧化氢与显色剂反应呈现紫色，该有色物质在546nm 有大吸收峰，进而 计算得到肌酐含量。
试剂盒组成和配制：
试剂名称 | 规格 | 保存要求 | 备注 |
试剂一 | 液体17.5mL×1瓶 | 4℃保存 | |
试剂二 | 液体6mL×1瓶 | 4℃保存 | |
标准管 | 粉体2mg×1支 | 4℃保存 | 1mL蒸馏水溶解即标准品浓度为2mg/mL,再用蒸馏水稀释40倍(1:39份水)0.05mg/mL,即442μmol/L的肌酐标准品待检液。 |
所需的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径1cm),水浴锅、离心机、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。
肌酐含量检测：
建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费!
1、样本制备：
① 组织样本：取约0 . 1g 组织样本，加1mL的提取液研磨，粗提液全部转移到EP管中，12000rpm, 常温离心10min, 上清液待测。
② 液体样品：澄清的液体可直接检测；若浑浊则离心后取上清液检测。
2、上机检测：
① 可见分光光度计预热30min, 设置温度在37℃,设定波长到546nm 。
② 做实验前选取2个样本，找出适合本次检测样本的稀释倍数 D。
③ 所有试剂解冻至室温，在1mL 玻璃比色皿(光径1cm) 中依次加入：
试剂名称(μL) | 测定管 | 空白管(仅做一次) | 标准管(仅做一次) |
样本 | 30 | | |
蒸馏水 | 200 | 230 | 200 |
标准品 | | | |
试剂一 | 350 | 350 | 350 |
混匀，37℃孵育5min,于546nm处读取吸光值A |
试剂二 | 120 | 120 | 120 |
混匀，37℃孵育5min后于546nm处读取吸光值A2,△A=A2-Al。 |
注:
1、测定管的 A 大于0.8,须用蒸馏水对样本进行稀释，稀释倍数 D 代入计算公式。
2、若△A 的值小于0.005,可增加样本加样体积 V1 (如由30μL 增至60μL 或更多，则试蒸馏水相应减少，空白管和标准管不变),或增加样本取样质量 W; 则改变后的 V1 和 W需代入公式重新计算。
结果计算
1、按照质量计算：
肌酐含量(nmol/g)=(C标准×V2)×(△A测定-△A空白)÷(△A标准-△A空白)÷(V1÷V×W)×D=442×(△A 测定-△A 空白)÷(△A标准-△A 空白)÷W×D
2、按照体积计算：
肌酐含量(μmol/L)=(C标准×V2)×(△A测定-△A空白)÷(△A标准-△A空白)÷V1×D =442×(△A 测定-△A空白)÷(△标准-△A空白)×DC 标准---肌酐标 品，0.05mg/mL=442μmol/L=442nmol/mL;V1---加入样本体积，0.03mL;V2--- 加入标准品体积，0.03mL;V---提取液体积，1mL;Mr---肌酐 分子量，113;W--- 质量，g;D---稀释倍数，未稀释即为1。
