1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)检测试剂盒 ; 25管/24样
测定原理：
在 Rubisco的催化下，1分子的核酮糖-1,5-二磷酸(RuBP)与1分子的CO2结合，产生2分子的 3-磷酸甘油酸(PGA) ，PGA可通过外加的 3-磷酸甘油酸激酶和甘油醛-3-磷酸脱氢酶的作用，产生甘油醛-3-磷酸，并使还原型辅酶Ⅰ(NADH)氧化。因此，340nm吸光度的变化可计算还原型辅酶Ⅰ氧化速率，还原型辅酶Ⅰ氧化速率可反映Rubisco的活性。
自备的仪器和用品：
可见-紫外分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1ml石英比色皿、研钵、冰、蒸馏水。
试剂的组成和配制：
提取液一：液体25ml ×1瓶，4℃保存；
提取液二：液体25ml ×1瓶，4℃保存；
试剂一：30ml×1瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存，临用前加入12.5ml试剂一，充分混匀备用，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
试剂三：粉剂×1瓶，-20℃保存，临用前加入12.5ml试剂一，充分混匀备用，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
试剂四：粉剂×1瓶，-20℃保存，临用前加入1.25ml试剂一，充分混匀备用，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
样本的前处理：
粗酶液提取详见试剂盒内说明书。测定组织、细菌和细胞时需要测定蛋白浓度。可用总蛋白定量测试盒(BCA法)进行蛋白浓度的测定。
测定步骤：
1、分光光度计预热 30min以上，调节波长至 340nm,蒸馏水调零。
2、样本测定：
(1） 工作液的配制：临用前将试剂二和试剂三1:1混合，用多少配多少；在1ml石英比色皿中，加入50ul样本、50ul试剂四和 900ul工作液，立即混匀，记录△340nm处20s时吸光值 A1和5min20s时的吸光值A2，计算 A=A1-A2。
Rubisco活性计算：
1、按照样本蛋白浓度计算：
单位定义：
25℃中1mg蛋白1min氧化1nmolNADH为一个酶活力单位。
Rubisco（nmol/min/mg prot）=[△A×V反总÷(ε×d）×109]÷（V 样×Cpr）÷T=643×△A÷Cpr
此法需要测定粗酶液中蛋白质浓度，建议选购本公司生产的BCA 法蛋白浓度测定试剂盒。
2、按样本鲜重计算：
单位定义：
25℃中1g组织1min氧化1nmolNADH为一个酶活力单位。
Rubisco（nmol/min/g鲜重）=[△A×V反总÷ (ε×d）×109]÷（V样÷V样总×W）÷T=643×△A÷W V反总：反应体系总体积，
1×10-³ L；ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×10³L/mol/cm ；d：比色皿光径，1cm ；V 样：加入样本体积，0.05mL；V 样总：加
入提取液体积1mL；T：反应时间，5min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。
