溶菌酶(LZM)检测试剂盒/96样
测定意义：
溶菌酶又叫胞壁质酶或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶。能催化某些细菌细胞壁多糖的水解，从而溶解这些细菌的细胞壁，起到杀死细菌的作用。溶菌酶可使一定浓度的浑浊菌液降解，使浊度降低，透光度增加，可通过光度变化来测定溶菌酶活性大小。
试剂盒组成和配制:
试剂名称 | 规格 | 保存要求 | 备注 |
试剂一 | 液体30mL×1瓶 | 4℃保存 | |
试剂二 | 粉剂mg×1 瓶 | 4℃干燥保存 | 临用甩几下使粉剂落入底部,再加 22mL试剂一涡旋振荡,至全部溶解备用。 |
标准品 | 粉剂mg×1支 | -20℃保存 |
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所需的仪器和用品:
酶标仪、96孔板、可调式移液器、水浴锅 / 恒温培养箱、离心机、蒸馏水。
溶菌酶(LYS/L ZM)活性检测:酐含量检测：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定 ，了解本批样品情况 ，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 液体样本：澄清的液体直接检测，若浑浊则离心后取上清液检测。
② 组织样本：取约 0.1g 组织，加入1mL 生理盐水，进行冰浴匀浆。4℃×12000rpm 离心10min，取上清，置冰上待测。
注：若增加样本量，可按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为 1 ：5~10 的比例进行提取。
2、上机检测：
① 酶标仪预热 30min，设置温度在 37℃,设定波长到 530nm。
② 标准品制备：临用前甩几下使粉剂落入底部,再加1mL蒸馏水充分溶解，再用蒸馏水稀释100 倍(即1 ：99),终浓度为200U/mL,即10μg/mL。
③ 所有试剂在37℃条件下孵育5min，在96孔板中依次加入：
试剂名称 | 测定管 | 空白管(仅做一次) |
样本 | 20 | |
标准品 | | 20 |
试剂二 | 200 | 200 |
混匀,30s于530nm读取吸光值A 1,2 m i n 3 0 s时再读取A 2，△A = A1- A2。 |
注：
1、加完试剂二反应即开始，若是批量检测，建议加完样本后，用排枪加试剂二，避加样时间造成测定误差或者分批测定样本。
2、若 A2 的值小于 0.2，可对样本用蒸馏水稀释后再测定。稀释倍数D代入公式算。3、若测定管的△A 小于 0.005，可增加样本上清液体积 V2(如增至 50 μL，则标准管多加30 μL 蒸馏水，保证两管总体积一致)，则改变后的 V2 代入计算公式重新计算。
结果计算
1、按照体积计算：
溶菌酶含量(μg/mL)=C 标准×△A 测定管÷△A 标准管×D=10×△A 测定管÷△A标准管×D
2、按样本鲜重计算：
溶菌酶含量(μg/g)=(C 标准 ×V1) × △A 测定管÷ △A标准管 × D÷(W ×V2÷V) =10×△A 测定管÷△A 标准管÷W×D
3、按样本蛋白浓度计算：
溶菌酶含量(μg/mg prot)=(C 标准 ×V1) ×△A 测定管 ÷△A 标准管×D÷(Cpr ×V2÷V) =10×△A 测定管÷△A 标准管÷Cpr × DC 标准---标品浓 度，200U/mL，即10 μg/mL；V1---标准品加样体积，20 μL=0.02mL；V2---样本加样体积，20 μL=0.02mL；D---稀释倍数，未稀释即为 1； V ---提取液,1mL； W---取样质量，g；Cpr---样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的蛋白含量测定试剂盒。
