NADPH氧化酶活性检测试剂盒 ; 20T/10样
反应原理：
细胞膜上的 NADPH 氧化酶被激活，将还原型辅酶Ⅱ（NADPH）转变为氧化型辅酶Ⅱ（NADP+），氧分子则获得电子形成超氧阴离子O2- ，由O2-又可生成 H2O2和OH－。其超氧阴离子产物具有杀死微生物的功能。NADPH 氧化酶异常将导致慢性肉芽肿病（Chronic Granulomatous Disease；CGD）。基于底物还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH），在特异性抑制剂联苯基三价碘（diphenyleneiodonium；DPI）的存在下，受到NADPH 氧化酶的催化作用，转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP+），产生吸光峰值的变化，通过分光光度仪（340nm波长）检测，来测定NADPH 氧化酶的特异活性。其反应方式为：
试剂组成：
清理液(Reagent A)30毫升
裂解液(Reagent B)5毫升
缓冲液(Reagent C)20毫升
反应液(Reagent D)2.5毫升
阴性液(Reagent E)2毫升
底物液(Reagent F)500微升
专性液(Reagent G)200微升。
保存方式：
保存清理液(Reagent A)和阴性液(Reagent E)在4℃冰箱里，其余的保存在－20℃冰箱里，避免反复冻融；反应液(Reagent D)和底物液(Reagent F)，避免光照，有效保证6月
用户自备:
15 毫升锥形离心管：用于样品操作的容器
1.5毫升离心管：用于样品操作和保存的容器4℃（微型）台式离心机：用于样品处理
DOUNCE匀浆器：用于裂解组织细胞
恒温培养箱或恒温水槽：用于反应物孵育
比色皿：用于光度测定的容器
分光光度仪：用于光度分析
实验步骤：
实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的试剂溶液置入冰槽里融化；反应液（Reagent D）和底物液（Reagent F）注意避光。然后进行下列操作。
1、样本提取详见试剂盒内说明书。测定组织和细胞同时需要测定蛋白浓度。可用总蛋白定量测试盒（考马斯亮蓝法）或总蛋白定量测试盒(BCA 法)进行蛋白浓度的测定。
2、测定准备
1、从-70℃取出待测样品（例如组织裂解悬液样品等），置于冰槽里
2、设定好分光光度计：30℃、波长为340nm，间隔30秒，读数5次（共2分钟），置零
3、缓冲液（ReagentC）室温预热
4、操作表
| 阴性对照孔 | 样本总活性 | 样本非特异活性 |
试剂三(μl） | 780 | 780 | 760 |
试剂四(μl） | 100 | 100 | 100 |
试剂六(μl） | 20 | 20 | 20 |
轻摇混匀，30℃孵育 3min |
试剂五(μl） | 100 | | |
待测样本(μl) | | 100 | 100 |
试剂七(μl) | | | 20 |
充分混匀，波长340nm，测定初始吸光度值A0；转入30℃孵育箱（或者在30℃水浴箱）中温浴2min，即刻放入分光光度计测定吸光度值A2 |
单位定义及活性计算公式
NADPH氧化酶活性单位浓度定义：在30℃室温下，pH 7.0的情况下，每单位酶在单位时间内（每分钟）氧化1微摩尔的还原型辅酶Ⅱ（NADPH）
