β-葡萄糖醛酸苷酶(β-GD)检测试剂盒 ; 50管/48样
测定原理:
β -葡萄糖醛酸苷酶 ( β-Glucuronidase,β-GD)作用于专一性底物释放出游离的酚酞,用比色法测定游离酚酞的量表示酶的活力。
试剂的组成和配制:
试剂一:粉剂×3支;临用前每支粉剂中加1.0ml的试剂二(外源性),充分混匀后-20℃以下保存;
试剂二(外源性):液体15ml×1 瓶;4℃保存;
试剂三:液体100ml×1瓶;4℃保存
试剂四:1umol/ml酚酞标准1ml×1支;4℃避光保存。
操作步骤
空白管
标准管
测定管
双蒸水( ml)
0.05
1μmol/ml酚酞标准(ml)
10%组织匀浆上清( ml)
考马斯亮蓝显色液( ml)
3.0
试剂一( ml)
试剂二( ml)
0.2
混匀后,37℃水浴 1小时(准确计时)
试剂三( ml)
2.0
混匀后,3500转/分,离心10分钟,取上清,540nm处,1cm光径,双蒸水调零,测定各管的吸光度值。
计算公式及举例:
1、单位定义:
每毫克组织蛋白在 37℃条件下,每分钟能催化生成1μmol的酚酞的酶量就是1个酶活力单位
2、计算公式:
β -GD活力测定OD值-空白OD值×标准品浓度÷反应时间÷待测样本=蛋白浓度(U/mgprot)标准OD 值-空白OD值(1μmol/ml)(60分钟)(mgprot/ml)