γ-谷氨酰半胱氨酸连接酶(GCL)检测试剂盒 ; 50T/24样
测定原理：
在 ATP 和 Mg2+存在下，GCL 催化谷氨酸和半胱氨酸合成γ-谷氨酰半胱氨酸；同时 ATP 分解产生无机磷，通过测定无机磷增加速率，即可计算出 GCL 活性。
自备仪器用品：
低温离心机、可见分光光度计、水浴锅、1mL 玻璃比色皿、浓硫酸、蒸馏水
试剂组成和配制：
试剂一：液体×1瓶，4 °C保存；
试剂二：粉剂×1瓶，4 °C保存，临用前加14mL蒸馏水充分震荡溶解；
试剂三：粉剂×1瓶，4 °C保存，临用前加 3.5mL 蒸馏水充分震荡溶解；
试剂四：液体×1瓶，室温保存；
试剂五：粉剂×1瓶，4 °C保存，临用前加30mL蒸馏水充分震荡溶解，缓缓加入1.0mL 浓硫酸，边加边搅拌。
样品前处理：
样本粗酶液提取详见说明书。测定组织和细胞同时需要测定蛋白浓度。
可用总蛋白定量测试盒（考马斯亮蓝法）或者 总蛋白定量测试盒(BCA 法)进行蛋白浓度的测定。
GCL测定步骤：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长到660nm，用蒸馏水调零；
2、空白管：
(1）依次加入双蒸水120μL、试剂一 240μL 、试剂二260μL和试剂三60μL，混匀后盖紧，37 °C水浴准确反应15分钟；
(2）加入试剂四300μL，混匀后，室温（25 °C 左右）下10000rpm离心10分钟，取上清500μL待测；
(3）加入试剂五 500μL ，混匀后盖紧，45°C水浴10分钟，冷却后测定660nm处吸光率，对大量样品，空白管只需做1-2个。
3、测定管：
(1）依次加入试剂一 240 μL 、试剂二260μL 、试剂三 60μL 和前处理样品上清120 μL，混匀后盖紧，37°C 水浴准确反应15分钟；
(2）加入试剂四300μL，混匀后，室温（25°C 左右）下 10000rpm 离心10分钟，取上清500μL待测；
(3）加入试剂五 500μL，混匀后盖紧，45°C 水浴10分钟，冷却后测定660nm处吸光率，计算△A=A测定管-A空白管。
注：吸光率需在水浴完成后尽快测定完成。
