土壤硝态氮检测试剂盒/48样
测定意义：
硝态氮是指硝酸盐中所含有的氮元素，土壤中的有机物分解生成铵盐，被氧化后变为硝态氮。土壤中硝态氮是高等植物吸收氮的主要形式之一，其含量直接关系到作物的产量与品质。土壤浸出液中硝酸根离子在220nm 有明显光吸收而在275nm 波长处没有吸收峰，通过测定土壤浸出液在275nm 处的吸光度，乘以一个校正因素 f 以消除有机质在220nm 波长处的光吸收干扰。进而得到土壤中硝态氮的含量。
试剂盒组成和配制：
试剂名称 | 规格 | 保存要求 | 备注 |
试剂一 | 粉剂g×1瓶 | ④℃保存 | 临用前先加50mL的蒸馏水，全部转移到量筒(自备)中，再加蒸馏水定容至300mL,混匀，备用。 |
标准品 | 液体×1支 | 4℃保存 | 若重新做标曲，则用到该试剂。 |
所需的仪器和用品：
紫外分光光度计、石英比色皿(光径1cm)、 蒸馏水、天平、常温离心机、量筒、振荡培养箱。
土壤硝态氮的测定：
建议正式实验前选取2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费!
1、样本制备：
取约1g新鲜土样，过40目筛网备用。
注:
1、土壤经风干或烘干易引起 NO3--N变化，故一般都用新鲜土样测定。
2、硝酸根为阴离子,不为土壤胶体吸附，且易溶于水，很易在土壤内部移动，在土壤剖面上下层移动频繁，因此测定硝态氮时注意采样深度。
2、上机检测：
① 紫外分光光度计预热30min以上。
② 在5mLEP管中加入：
| 测定管 | 空白管(仅做一次) |
样本(g) | 1 | |
试剂一(mL) | 5 | 5 |
25℃220rpm/min往复式振荡培养1h,混匀(成浑浊液状态)用慢速定性滤纸过滤,澄清的滤液待测。 |
取1mL至1mL石英比色皿中,220nm分别读吸光值A1、A2,再于275nm分别读吸光值A3、A4; |
A测定管=A1-(A3×f),A空白管=A2-(A4×f)△A=A测定管-A空白管注：f为矫正因素2.23。 |
注：若测定管于220nm的A值大于1,需用试剂一稀释滤液使A220nm的 值 在 1 以内，稀释倍数D需代入公式计算。
结果计算：
1、标准曲线方程：
y=0.2627x-0.0023;x 为标准品浓度(μg/mL),y为△A。
2、土壤硝态氮(NO₃--N)含量(mg/kg鲜土)=(△A+0.0023)÷0.2627×V÷W×D=19.04×(△A+0.0023)÷W×DV- --反应总体积,5 mL;D---稀释倍数,未稀释即为1;W--- 实际称取鲜土质量，g
注: 低检出限为0.5μg/g。
附：标准曲线制作过程：
1、标准品母液(100μg/mL);
2、用试剂一把母液稀释成六个浓度梯度的标准品：0,0.5,1,2,3,4. μg/mL。 也可根据实 际样本来调整标准品浓度。
3、直接取不同浓度的标准品1mL至1mL玻璃比色皿中，分别于220nm和275nm读吸光值 A1、A2,A标准品=A1-(A2×f)。根据结果即可制作标准曲线。
