土壤硝态氮检测试剂盒/96样
测定意义：
硝态氮是指硝酸盐中所含有的氮元素，土壤中的有机物分解生成铵盐，被氧化后变为硝态氮。土壤浸出液中硝酸根离子在 220nm 有明显光吸收而在 275nm 波长处没有吸收峰，通过测定土壤浸出液在 275nm 处的吸光度，乘以一个校正因素 f 以消除有机质在 220nm 波长处的光吸收干扰。进而得到土壤中硝态氮的含量。
试剂组成和配制：
试剂名称 | 规格 | 保存要求 | 备注 |
试剂一 | 粉剂g×1瓶 | ④℃保存 | 临用前先加50mL的蒸馏水，全部转移到量筒（自备）中，再加蒸馏水定容至 600mL。 |
标准品 | 液体×1支 | 4℃保存 | 若重新做标曲，则用到该试剂。 |
所需的仪器和用品：
酶标仪、96孔UV板（用于紫外光波长下的测定）、蒸馏水、天平、常温离心机、量筒、振荡培养箱。
土壤硝态氮的测定：
建议正式实验前选取2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费!
1、样本制备：
① 组织样本：取约1g 新鲜土样，若鲜土呈松散状，尽可能过40目筛网备用。
注：
1、土壤经风干或烘干易引起 NO3－-N 变化，故一般都用新鲜土样测定。
2、硝酸根为阴离子，不为土壤胶体吸附 ，且易溶于水 ，很易在土壤内部移动 ，在土壤剖面上下层移动频繁，因此测定硝态氮时注意采样深度。
2、上机检测：
① 酶标仪预热30min以上，
② 在5mLEP管中加入
| 测定管 | 空白管(仅做一次) |
样本(g) | 1 | |
试剂一(mL) | 5 | 5 |
25℃,220rpm/min往复式振荡培养1h,混匀(成浑浊液状态)用慢速定性滤纸过滤，澄清的滤液待测。 |
取200μL滤液至96孔板中，220nm分别读吸光值A1、A2，275nm分别读吸光值A3、A4； |
A测定管=A1-(A3×f),A空白管=A2-(A4×f)△A=A测定管-A空注：f为矫正因素2.23。 |
注 : 若测定管于220nm的 A 值大于1，需用试剂一稀释滤液使A220nm的值在1以内，稀释倍数D 需代入公式计算。
结果计算：
1、标准曲线：
y= 0.1305x - 0.0017 ；x为标准品浓度(μg/mL)，y为吸光值△A。
2、土壤硝态氮(NO3--N)含量(mg/kg 鲜土)=(△A+0.0017)÷0.1305×V÷W×D=38.32× (△A+0.0017) ÷W× D V---反应总体积，5mL；D---稀释倍数，未稀释即为1； W---实际称取鲜土质量，g。
注：低检出限为0.5μg/g。
附：标准曲线制作过程：
1、制备标准品母液（100μg/mL）。
2、用试剂一把母液稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 1, 2, 3, 4, 5. μg/mL。也可根据实际样本来调整标准品浓度。
3、直接取不同浓度的标准品200μL至96孔板中，分别于220nm和275nm读吸光值A1、A2 ，A 标准品=A1-(A2×f)。根据结果即可制作标准曲线。
