丙酮酸激酶(PK)检测试剂盒 ; 50管/48样
测定原理:
丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PK)在ADP存在下可催化PEP产生丙酮酸,丙酮酸再由LDH将其转变为乳酸,同时将NADH变为NAD。
试剂组成与配制:
试剂一:液体60ml×1瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂×2支,-20℃保存,每支用时加双蒸水1.4ml,用不完-20℃以下保存7天。试剂三:液体×4支,4℃保存,不可冷冻,用不完4℃~8℃保存。
试剂四:粉剂×4支,-20℃保存,用时每支加双蒸水320µl,用不完-20℃以下保存。
试剂五:粉剂×4支,-20℃保存,用时每支加双蒸水650µl,用不完-20℃以下保存。
试剂六:稳定剂20ml×1 瓶,4℃保存。
操作过程:
1、样本前处理:
①、50%红细胞悬液的制备:取肝素抗凝全血,放冰箱4℃~8℃自然沉淀,吸弃血浆、白细胞、血小板部分,用冷的生理盐水洗涤红细胞1~3次,1000 转/分钟离心5分钟,洗完后再用冷的生理盐水制成 50%红细胞悬液(红细胞:生理盐水=1:1)。
②、1︰19溶血液的制备:取50%的红细胞悬液20μl加试剂六稳定剂180μl,即1︰9稀释后备用。
③、血红蛋白测定:取1︰19 溶血液用氰化高铁血红蛋白测试试剂进行血红蛋白Hb的测定,具体见Hb测定说明书。
操作表:
加样本的同时开始计时,快速混匀后,波长340nm, 0.5cm光径的石英比色皿,双蒸水调零,测定30秒时初始吸光度A1值,然后将比色皿中的反应液倒入预先编号的原试管中,放入37℃水浴箱中准确水浴15分钟,然后取出试管测定15分30秒时的吸光度A2值。
酶活力的计算:
1、单位定义:在37℃,pH7.6 的条件下,每克Hb每分钟将1µmol的PEP转变成丙酮酸为一个酶活力单位。
2、计算公式:
