氨含量检测试剂盒/96样
测定意义：
氨可由微生物蛋白质分解代谢产生，此外肝脏疾病也会影响氨水平。
本试剂盒利用氨在强碱的环境下与次氯酸盐和苯酚作用，生成水溶性染料靛酚蓝，溶液颜色稳定。其在 630nm 处有特征吸收峰，吸光值与氨含量成正比。
试剂组成和配制：
试剂名称 | 规格 | 保存要求 | 备注 |
提取液 | 液体100mL×1瓶 | 4℃保存 | |
试剂一 | 液体6mL×1瓶 | 4℃保存 | |
试剂二 | 液体3mL×1瓶 | 4℃保存 | |
试剂三 | A：液体 1.7mL×4支
B：液体 0. 1mL×1支 | 4℃保存 | 临用前取 15μL 的 B 液进一瓶 A 液中，混匀后作为试剂三使用。混匀后的试剂三一周内用完。 |
标准品 | 液体2mL×1支 | 4℃保存 | 标品浓度为10μg/mL的氨 |
所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、可调式移液器、离心机、蒸馏水。
土壤硝态氮的测定：
建议正式实验前选取2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费!
1、样本制备：
① 液体样品：澄清的液体可直接检测；若浑浊则离心后取上清液检测。
② 组织样本：取约 0. 1g 组织样本，加 1mL 的提取液研磨，粗提液全部转移到 EP 管中12000rpm，常温离心 10min ，上清液待测。
注：若增加样本量，可按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为1：5~ 10 的比例进行提取。
③ 细菌/细胞样本：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细胞加入 1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200W ，超声3s，间隔 10s ，重复30次）；12000rpm 4℃离心 10min ，取上清，置冰上待测。
注：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（10⁴）：提取液（mL）为 500~ 1000：1 的比例进行提取。
2、上机检测：
① 酶标仪预热 30min ，设置温度在37℃ , 设定波长到 630nm。
② 所有试剂解冻至室温，在96孔板中依次加入：
试剂名称 (μL） | 测定管 | 标准管（仅做一次） | 空白管（仅做一次） |
样本 | 15 | | |
标准品 | | 15 | |
蒸馏水 | 45 | 45 | 60 |
试剂一 | 60 | 60 | 60 |
试剂二 | 30 | 30 | 30 |
试剂三 | 60 | 60 | 60 |
混匀，37 度放置 20min,于 630nm 处读取 A,△A=A 测定-A 空白。5℃,220rpm/min往复式振荡培养1h,混匀(成浑浊液状态)用慢速定性滤纸过滤，澄清的滤液待测。 |
注 :
1、试剂一和二和三需分开加，不能事先混匀。
2、测定管的 A 值若超过 1 ，可把样本用蒸馏水进行稀释，稀释倍数 D 代入计算公式。3、若△A 的差值在零附近徘徊，可增加样本加样量 V1（如增至 30μL，则蒸馏水相应减少，保持总体积不变），则改变后的 V1 需代入公式重新计算。测定管于220nm 的 A 值大于1，需用试剂一稀释滤液使A220nm的值在1以内，稀释倍数D 需代入公式计算。
结果计算：
1、按液体体积计算：
氨含量(μg/mL)=(C 标准×V 标)×ΔA÷(A 标准-A 空白)÷V1×D= 10×ΔA÷(A 标准-A空白)×D氨含量(μmol/L)=(C标准×V标)×ΔA÷(A标准-A空 白)÷V1×D×10³÷Mr=555.6×ΔA÷(A 标准-A 空白)×D
2 、按样本鲜重计算：
氨含量(μg/g)=(C 标准×V 标)×ΔA÷(A 标准-A 空白)÷(W×V1÷V)×D= 10×ΔA÷(A 标准-A 空 白)÷W×D
3 、按细菌/细胞数量计算：
氨含量(μg/10⁴ cell)=(C 标准×V 标)×ΔA÷(A 标准-A 空白)÷(500×V1÷V)×D=0.02×ΔA÷(A 标准-A 空白)×DC标准---标品浓度为10μg/mL的 氨；V标---标准品加样体积，0.015mL；V1---加入样本体积，0.015mL；V---提取液体积，1mL；W---取样质量；500---细胞数量,百万;Mr--- 氨分子量，18；D---稀释倍数，未稀释即为 1。
