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超微量ATP酶检测试剂盒 ; 100管/25样

超微量ATP酶检测试剂盒 ; 100管/25样

  • 货号:YJ49298
  • 可售卖地:全国
  • 供货:现货供应
  • 保 质 期:半年
  • 品牌:源桔生物
  • 保存温度:2-8℃
  • 检测方法:微量法
  • 分类:氧化与抗氧化系列
  • 规格:100管/25样
  • 用途:仅供科研使用
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源桔生物 YJ49298 100管/25样 ¥1050 大量 液体盒装
  • 商品详情

超微量ATP酶检测试剂盒 ; 100管/25样

测定原理:

ATP酶可分解ATP生成 ADP及无机磷,测定无机磷的量可判断 ATP酶活力的高低。

组份

100管/24样

200管/48样

保存

试剂一

液体

30ml×1瓶

30ml×2瓶

4℃保存 6个月

试剂二

液体

4ml×2瓶

4ml×4瓶

4℃保存 6个月

试剂三

粉剂

粉剂×8支

粉剂×16支

-20 保存 6个月

试剂三的配制:用时每支试剂三粉剂加双蒸水 1ml,充分溶解。(用不完-20℃以下可保存一周。)

试剂四

液体

5ml×2瓶

5ml×4瓶

4℃保存 6个月

 

试剂五

甲液

7ml×8瓶

7ml×16瓶

4℃保存 6个月

 

乙液

6ml×8瓶

6ml×16瓶

4℃保存 6个月

[注]:试剂五乙液在冬天或 4℃长时间保存时可能会出现凝胶状物质,37℃溶解不了,可将其

60℃ 左右水浴 10  分钟即可完全溶解;甲液、乙液应防止磷污染。

试剂六

液体

50ml×2瓶

50ml×4瓶

室温保存 6个月

试剂七

10mmol/L标准磷贮备液

 

5ml×1瓶

 

5ml×1瓶

 

4℃保存 6个月

试剂八

液体

4ml×1瓶

4ml×2瓶

4℃保存 6个月

试剂九

粉剂

粉剂×4支

粉剂×8支

4℃保存 6个月

 

稀释液

0.5ml×4支

0.5ml×8支

4℃保存 6个月

试剂九的配制:用时取一支试剂九稀释液加入一支试剂九粉剂中,充分溶解,用不完 4℃保存。

试剂十

贮备液

0.1ml×3支

0.1ml×3支

4℃保存 6个月

 

 

0.9ml×3支

0.9ml×3支

 

试剂十的配制:用时取一支试剂十稀释液加入一支试剂十粉剂中,充分溶解,用不完 4℃保存。

双蒸水

40ml×1瓶

40ml×1瓶

4℃保存 6个月

0.1μmol/ml标准磷应用液的配制:
用时将10mmol/L 磷贮备液100倍稀释,即取0.1ml加双蒸水至10ml。
0.02μmol/ml 磷标准液的配制:
用时将0.1μmol/ml 磷标准液用双蒸水5倍稀释,即取0.1μmol/ml 磷标准液1ml加双蒸水4ml。
基质液的配制:
按试剂一︰试剂二︰试剂三=260 ︰80 ︰80比例混合。需多少配多少,现用现配。
显色剂的配制:
用时取一瓶试剂五甲液加入一瓶已预温好试剂五乙液中,充分混匀,需提前0.5小时配制,2~8℃条件下至少可保存 5 天,配好的显色剂的量够做13个管子(如果你的样本量很少,所需的显色剂的量较少,那么你可以按试剂五中的甲液︰乙液=7︰ 6 的比例自行配制显色剂,需多少配多少(按比例配制显色剂时要防止磷污染,最好用专用吸嘴)。
样本前处理:
样本处理详见说明书或本公司官网-技术文章部分关于样本处理的说明。测定组织和细胞同时需要测定蛋白浓度。可用总蛋白定量测试盒(考马斯亮蓝法)或者总蛋白定量测试盒(BCA  法)进行蛋白浓度的测定。
操作步骤:
1、酶促反应:

对照管

Na+k+-ATPase测定管

Ca2+Mg2-ATPase测定管

T-ATPase测定

双蒸水(ml)

0.16

0.12

 

0.16

样本(ml)

 

0.1

0.1

0.1

试剂八(ml)

 

 

0.08

 

试剂九(ml)

 

 

0.08

 

试剂十(ml)

 

0.04

 

 

试剂一(ml)

0.26

0.26

0.26

0.26

试剂二(ml)

0.08

0.08

0.08

0.08

试剂三(ml)

0.08

0.08

0.08

0.08

混匀,37℃准确反应 10分钟

试剂四(ml)

0.1

0.1

0.1

0.1

样本(ml)

0.1

 

 

 

混匀,3500  转/分,离心10分钟,取上清定磷

2、定磷:(0.02 μmol/ml 磷标准液 配制见第一页)

空白管

标准管

对照管

Na+k+-ATPase测定管

Ca2+Mg2-ATPase测定管

T-ATPase
测定管

双蒸水(ml)

0.3

 

 

 

 

 

0.02μmol/磷标准液(ml)

 

0.3

 

 

 

 

上清液(ml)

 

 

 

0.3

0.3

0.3

试剂五显色剂(ml)

1.0

1.0

1.0

1.0

1.0

1.0

混匀,室温静止 2分钟

试剂六(ml)

1.0

1.0

1.0

1.0

1.0

1.0

混匀,室温静置 5 分钟,在 636nm 处,1cm 光径,双蒸水调零,测各管吸光度值。

计算:
1、定义:
规定每小时每毫克组织蛋白的组织中 ATP 酶分解ATP产生 1µmol  无机磷的量为一个 ATP  酶活力单位。即微摩尔磷/毫克蛋白/小时(µmolPi/mgprot/hour)。
2、公式:

image.png

[注]:6*:定义上为每小时,实际操作为10分钟反应,所以必须乘以6。7.8**:反应体系中7.8倍稀释。