丙酮酸(PA)检测试剂盒/ 48样
测定意义：
丙酮酸在各种生化途径中起着重要作用，可在糖异生过程中转化为碳水化合物，或通过乙酰CoA 转化为脂肪酸。乳酸脱氢酶（LDH）可使丙酮酸转化为乳酸，同时使 NADH 氧化，利用 NADH 在 340nm 的下降量来计算丙酮酸含量。
试剂盒组成和配制：
试剂名称 | 规格 | 保存要求 | 备注 |
提取液 | 液体 60mL×1瓶 | 4℃保存 | |
试剂一 | 液体 40mL×1瓶 | 4℃保存 | |
试剂二 | 粉剂mg×1支 | 4℃保存 | 临用前加2.2mL蒸馏水溶解；溶解后-20℃保存2周。 |
试剂三 | 粉体mg×1支 | -20℃保存 | 临用前加2.2mL蒸馏水溶解，溶解后仍-20℃ |
所需的仪器和用品：
紫外分光光度计、 1mL 石英比色皿（光径1cm）、台式离心机、可调式移液器、研钵、冰、蒸馏水。
土壤硝态氮的测定：
建议正式实验前选取2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费!
1、样本制备：
① 组织样本：称取约 0.1g 组织，水分充足的样本可取约 0.5g，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆， 12000rpm，室温离心10min，取上清液待测 。（若组织样本蛋白含量很高，可进行脱蛋白处理）。
注：若增加样本量，可按照组织质量（g）： 提取液体积(mL)为 5~10： 1 的比例进行提取。
② 细菌/培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细胞加入1mL 提取液，超声波破碎(冰浴,功率20％或200W,超声3s,间隔10s,重复30次)， 12000rpm，室温离心10min，取上清液待测。
注：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（10⁴)： 提取液（mL）为 500~1000： 1 的比例进行提取。
③ 液体样品：近似中性的澄清液体样本可直接检测；若为酸性样本则需先用NaOH(2M)调PH值约 7.4，然后室温静置30min，取澄清液体直接检测。
2、上机检测：
① 紫外分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
② 在1mL 石英比色皿中依次加入
试剂名称(μL） | 测定管 |
样本 | 40 |
试剂一 | 680 |
试剂二 | 40 |
混匀,2min后于340nm下读取A1。 |
试剂三 | 40 |
混匀(轻轻晃动几下),5min后于34下降, 直到吸光值保持2min内稳0nm下读取A 2,(若吸光 度继续定不变为止。)△ A = A 1 - A 2 。 |
注：若△A 的值在零附近徘徊，可以增加样本量 V1（相应试剂一减少），或样本准备制备的时候，增加样本质量 W，则改变后的 V1 或 W 需代入计算公式重新计算。
结果计算：
1、按照样品质量计算：
丙酮酸含量(µg/g 鲜重)= [ΔA÷(ε×d) ×V2 × Mr × 10⁶]÷ (W ×V1÷V) =279.6 ×ΔA ÷W
2、按照细菌或细胞密度计：
丙酮酸含量(μg/10⁴cell)＝[ΔA÷(ε×d) ×V2 × Mr × 10⁶]÷ (500 ×V1÷V) =0.559 ×ΔA
3、按照液体体积计算：
丙酮酸含量(μg/mL)=[ΔA÷(ε×d) ×V2 × Mr × 10⁶]÷V1=279.6×ΔAε---NADH 摩尔消光系数，6.3 × 10³ L/mol/cm； d---96 孔板光径， 1cm；V---加入提取液体积,1 mL； V1---加入反应体系中样本体积，0.04mL；V2---反应总体积，8× 10-⁴ L;Mr---丙酮酸分子量,88.06；W---样 本质量，g；500---细菌或细胞总数，500 万。
