细胞色素b5含量检测试剂盒 ; 100T/96S
测定意义：
细胞色素 P450酶是一组主要存在于肝脏的同工酶，在外源物质代谢中具有重要作用，尤其是药物和毒物的代谢。细胞色素P450和细胞色素b5是P450酶系的两个血红素蛋白，其比值的变化与P450代谢活性密切相关。
测定原理：
氧化型细胞色素b5经连二亚硫酸钠还原后，在424nm处有最大吸收峰，通过测定 424nm和490nm处吸光值的差异，即可计算出细胞色素b5的含量。
自备仪器和用品：
普通离心机，超速离心机、可调式移液枪、紫外分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：粉剂×2瓶，4℃保存。临用前各加100mL蒸馏水，充分溶解。
试剂二：液体×1瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存。
工作液配制：临用前配制，戴一次性手套，小心打开试剂三瓶盖，加试剂二20mL充分溶解，4℃避光可保存1周。
样品中细胞色素b5提取：
1、除去细胞核，线粒体等大分子物质：称约0.5g组织，加入1mL试剂一，冰上充分研磨，10 000g 4℃离心30min，取上清液，转入超速离心管中。
2、粗制微粒体：100000g ，4℃离心60min，弃上清液。
3、除血红蛋白等杂质：向步骤2的沉淀中加1mL试剂一，盖紧后充分震荡溶解，100000g 离心30min，弃上清液。
4、待测液：向步骤3的沉淀中加试剂二0.5mL，盖紧后充分震荡溶解，即待测液，该待测液需当天测定。
细胞色素b5含量测定操作：
1、分光光度计/酶标仪预热 30 min。
2、工作液置于 25℃水浴中预热 30 min。
3、空白管：取1mL玻璃比色皿，加入10μL蒸馏水，200μL工作液，室温静置2 min ，424nm和490nm处吸光值，424nm处吸光值记为 A空白管1，490nm处吸光值记为A空白管2。△A空白管=A空白管1- A空白管 2。
4、测定管：取1mL玻璃比色皿，加入10 μL待测液，200μL工作液，室温静置 2 min ，424nm和490nm 处吸光值，424nm处吸光值记为A测定管1，490nm 处吸光值记为 A 测定管2。△A 测定管=A 测定管1- A 测定管2。
注 意：
只需要做一个空白管
样品细胞色素b5含量计算公式：
a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
(1) 按蛋白浓度计算
细胞色素b5含量(nmol/mgprot)= (△A测定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反总÷(Cpr×V样）= 122.8×(△A 测定管-△A 空白管)÷Cpr
(2) 按样本质量计算
细胞色素b5含量(nmol/g鲜重)= (△A测定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反总×(V样总÷V 样)÷W= 61.4×(△A测定管-△A空白管)÷Wε ：
还原型细胞色素 b5 纳摩尔消光系数，171×10-⁶L/nmol/cm；d：比色皿光径(cm)，1cm； V 反总：反应体系总体积，210 μL
=2.1×10-4 L；Cpr：待测液蛋白质浓度(mg/mL)，需要另外测定；V 样：加入反应体系中待测液体积，10 μL=0.01mL；V 样总：
待测液总体积，0.5 mL；W：样品质量（g）。
b. 使用 96 孔板测定的计算公式如下
(1) 按蛋白浓度计算
细胞色素b5含量(nmol/mg prot)=(△A测定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反总÷(Cpr×V样)=245.6×(△A测定管-△A空白管)÷Cpr
(2) 按样本质量计算
细胞色素 b5 含量(nmol/g鲜重)= (△A测定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反总×(V样总÷V 样)÷W=122.8×(△A 测定管-△A空白管)÷Wε：
还原型细胞色素b5纳摩尔消光系数，171×10-⁶L/nmol/cm；d：96 孔板光径（cm），0.5cm； V反总：反应体系总体积，210 μL
=2.1 × 10-4 L；Cpr：待测液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定；V 样：加入反应体系中待测液体积，10 μL=0.01mL；V
样总：待测液总体积，0.5 mL；W：样品质量（g）。
