NADPH-细胞色素C还原酶(NCR)检测试剂盒 ; 50管/48样
测定意义：
细胞色素P450酶是一组主要存在于肝脏的同工酶，在外源物质代谢中具有重要作用，尤其是药物和毒物的代谢。NCR作为P450酶系的重要一员，催化氧化型P450还原再生。
测定原理：
NCR催化NADPH还原氧化型细胞色素c生成还原型细胞色素c ，还原型细胞色素c在550nm处有特征吸收峰；通过测定550nm吸光度的增加速率，来计算NCR活性。
自备的仪器和用品：
可见分光光度计、普通离心机，超速离心机、可调式移液枪、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加100mL蒸馏水充分溶解。
试剂二：液体×1瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1瓶，-20℃保存。临用前配制，加2.6 mL蒸馏水充分溶解，4℃保存。
试剂四：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前配制，加550μL蒸馏水充分溶解，4℃保存。
粗酶液提取：
1、除去细胞核和线粒体等：称约0.5g组织，加入4℃预冷的1 mL试剂一，冰上充分研磨，10000g 4℃离心30min，取上清液，转移到超速离心管中。
2、粗制微粒体：4℃ , 100000g ，离心60min，弃上清液。
3、除血红蛋白等杂质：向步骤2的沉淀中加1mL试剂一，盖紧后充分震荡溶解，100000g 离心30min，弃上清液。
4、最终微粒体：向步骤3的沉淀中加试剂二0.5 mL，盖紧后充分震荡溶解，4℃保存待测。
测定操作：
1、分光光度计预热30 min，调节波长到550 nm，蒸馏水调零。
2、试剂二在37℃水浴中预热30min。
3、空白管：取1mL玻璃比色皿，依次加入50μL蒸馏水、900μL试剂二、50μL试剂三和10μL试剂四，迅速混匀后于550nm处测定2min内吸光值变化，第10s和第130s吸光值分别记为A1和A2，△A空白管=A2-A1。
4、测定管：取1mL玻璃比色皿，依次加入50μL粗酶液、900μL试剂二、50μL试剂三和 10μL试剂四，迅速混匀后于550nm处测定2min内吸光值变化，第10s和第130s吸光值分别记为A3和A4 ，△A测定管=A4-A3。
注 意：空白管只需要做一次。
计算公式：
(1) 按照蛋白浓度计算
活性单位定义：
37℃中，每毫克蛋白每分钟催化产生1nmol还原型细胞色素C为1个酶活单位。
NCR 酶活性(nmol/min/mg prot)= (△A测定管-△A空白管)÷ε÷d×V反总÷(Cpr×V样)÷T= 529×(△A测定管-△A空白管)÷Cpr
(2) 按照样本质量计算
活性单位定义:
37℃中，每克样品每分钟催化产生1nmol还原型细胞色素C为1个酶活单位。
NCR酶活性(nmol/min/g鲜重)= (△A测定管-△A空白管)÷ε÷d×V反总÷(W×V样÷V样总)÷T= 265×(△A测定管-△A空白管)÷W ε：
还原型细胞色素 C 摩尔消光系数，19100L/mol/cm=0.0191L/μmol/cm；d：比色皿光径，1cm；V 反总：反应体系总体积，
1010μL=0.00101L；Cpr： 上清液蛋白质浓度，mg/mL，需要另外测定；V 样：加入反应体系中上清液体 积，50μL=0.05mL；
V样总：加入提取液体积，0.5mL；W：样本质量，g；T：反应时间， 2min。
注意事项：
试剂三、试剂四临用前配制，配好未使用完的 4℃可保存两天。
