结合态淀粉合成酶(GBSS)检测试剂盒 ; 25管/24样
测定意义：
GBSS（EC 2.4.1.21）以束缚态存在于淀粉体中，催化淀粉链的加长反应，主要负责直链淀粉的合成。
测定原理：
GBSS 催化ADPG与淀粉引物(葡聚糖)反应,将葡萄糖分子转移到淀粉引物上，同时生成 ADP；进一步通过反应体系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和 6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化 NADP+还原为 NADPH，其中NADPH 生成量与前一步反应生成的 ADP 数量呈正比，通过 340nm 下测定 NADPH 的增加量，可以计算GBSS 活性。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、移液器、1 mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体25mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入7mL试剂一充分混匀备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入4mL试剂一充分混匀备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
试剂四：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入9mL试剂一充分混匀备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
试剂五：液体×1支，-20℃保存；临用前加入0.5mL蒸馏水，充分溶解备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
试剂六：粉剂×1支，-20℃保存；临用前加入0.5mL蒸馏水，充分溶解备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
粗酶液提取：
称取 0.1~0.2g组织(建议称取约 0.1g组织)，加入1mL提取液，冰浴中匀浆。10000g ，4℃离心10min ，弃上清，在沉淀中加入1mL提取液充分混匀，置冰上待测。
测定步骤：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长到340nm，蒸馏水调零。
2、在EP管中按顺序加入下列试剂
试剂名称（μL） | 测定管 |
样本 | 150 |
试剂二 | 270 |
混匀，30℃保温 20 min，置沸水浴中 1 min（盖紧，防止水分散失），冰浴冷却 |
试剂三 | 150 |
混匀，30℃保温 30 min，置沸水浴中 1 min（盖紧，防止水分散失），冰浴冷却，10000g 4℃离心 10min，取上清液（如果一次性测定样本较多，可将试剂四、五和六按比例配成混合液） |
上清液 | 450 |
试剂四 | 300 |
试剂五 | 15 |
试剂六 | 15 |
混匀后立即 340 nm 波长下记录初始吸光度 A1 和 2min 后的吸光度 A2，计算 ΔA=A2-A1。 |
注 意：试剂二如有沉淀，加入之前要使之充分溶解混匀。
GBSS活性计算：
1、按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：
每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmolNADPH定义为一个酶活力单位。
GBSS(nmol/min /mg prot)＝[ΔA×V反总÷(ε×d）×10⁹]÷(Cpr×V样)÷T×稀释倍数=529×ΔA÷Cpr此法需要自行测定样本蛋白质
浓度。
2、按照样本鲜重计算：
单位的定义：
每 g 组织每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
GBSS 活性（nmol/min /g鲜重）=[ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷（V样÷V样总×W)÷T×稀释倍数=529×ΔA÷WV 反总：反应体系总
体积，7.8×10-⁴L；ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22×10³L/ mol/cm；d：比色皿光径,1cm；V 样：加入样本体积，0.15 mL；V
样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，2 min；稀释倍数：1.9；Cpr：样本蛋白质浓度,mg/mL；W：样本质量
