ADPG焦磷酸化酶(AGP)检测试剂盒 ; 25管/24样
测定意义：
AGP (EC 2.7.7.21)主要存在于植物中，催化葡萄糖-1-磷酸与ATP反应生成淀粉合成的直接前体 ADPG，是植物淀粉生物合成的主要限速步骤。
测定原理：
AGP催化的逆向反应生成G1P，在反应体系中添加的磷酸己糖变位酶和 6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化生成6-磷酸葡萄糖酸和 NADPH，340nm 下测定NADPH增加速率，即可计算AGP活性。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：液体25mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体20mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入9mL蒸馏水充分溶解备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
试剂三：粉剂×1 瓶，-20℃保存；临用前加入5mL蒸馏水充分溶解备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
粗酶液制备：
按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例(建议称取约0.1g组织，加入1mL 提取液)，进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、试剂一置30℃保温10min以上。
3、在EP管中按顺序加入下列试剂
试剂名称（μL） | 测定管 |
试剂一 | 200 |
试剂二 | 320 |
样本 | 40 |
混匀，30℃保温 15 min，置沸水浴中 1min（盖紧，防止水分散失），冰浴迅速冷却后，4000g4℃离心5min，取上清液，在 1mL 石英比色皿中依次加入下列试剂 |
上清液 | 400 |
试剂一 | 425 |
试剂三 | 175 |
混匀后立即 340 nm 波长下记录初始吸光度 A1 和 2min 后的吸光度 A2，计算 ΔA=A2-A1。 |
AGP活性计算：
1、按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：
每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmolNADPH定义为一个酶活力单位。
AGP(nmol/min/mg prot)＝[ΔA×V 反总÷(ε×d)×10⁹]÷(V 样×Cpr)÷T×稀释倍数=2813×ΔA÷Cpr此法需要自行测定样本蛋白质
浓度。
2、按照样本鲜重计算：
单位的定义：
每g组织每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
AGP(nmol/min /g鲜重)＝[ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(W×V样÷V样总)÷T×稀释倍数=2813×ΔA÷WV 反总：反应体系总体积，
1×10-³L；ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22×10³L/ mol/cm；d：比色皿光径,1cm；V 样：加入样本体积，0.04 mL；V 样总：加
入提取液体积，1 mL；T：反应时间，2 min；稀释倍数：1.4；Cpr：样本蛋白质浓度,mg/mL ；W：样本质量。
