β-淀粉酶(β-AL)检测试剂盒 ; 50管/24样

β-淀粉酶(β-AL)检测试剂盒 ; 50管/24样

测定意义： 

淀粉酶负责水解淀粉，主要包括 α-淀粉酶和 β-淀粉酶。β-淀粉酶(EC 3.2.1.2)可随机地作用于淀粉中的 α-1,4-糖苷键，生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖。

测定原理： 

还原糖还原 3,5-二硝基水杨酸生成棕红色物质。α-淀粉酶不耐酸，β-淀粉酶不耐热。根据上述特性，钝化其中之一，就可测出另一种淀粉酶的活力。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、恒温水浴锅、离心机、可调式移液器、玻璃比色皿、研钵和蒸馏水。

试剂组成和配制：

试剂一：50mL×1瓶，常温保存，若有黄色晶体析出，需90℃加热溶解后再用；

试剂二：40mL×1瓶，4℃保存，若有沉淀析出，需 70℃加热后再用。

粗酶液制备：

组织：称取0.1~0.2g样本（建议称取约0.1g样本），加入1mL蒸馏水，研磨匀浆；将匀浆倒入离心管中，提取液在室温下放置提取 15min ，每 5min 振荡 1 次，使其充分提取；3000g ，25℃离心 10min，取上清液加蒸馏水定容至 10 mL，摇匀，即淀粉酶原液。吸取上述淀粉酶原液1mL ，加入4mL蒸馏水，摇匀，即为淀粉酶稀释液，用于 (α+β) 淀粉酶总活力的测定。

血清(浆)等液体样本：

(1) 直接检测 α-淀粉酶。

(2) 吸取淀粉酶原液1mL，加入4mL蒸馏水，摇匀，即为淀粉酶稀释液，用于(α+β)淀粉酶总活力的测定

测定步骤：

1、分光光度计预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。

2、试剂一和试剂二 40℃预热10min。

3、测定操作表

酶活性计算：

1、标准条件下：

      测定回归曲线为y=3.7215x -0.1778 ； x 为标准品浓度(mg/mL)，y为吸光值。

2、α-淀粉酶活性：

(1) 按照样本质量计算

      单位定义：

      每g组织每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活力单位。

      α-淀粉酶活性(mg/min/g 鲜重)=[(A2-A1＋0.1778)÷3.7215×V反总]÷(W×V样÷V样总)÷T=1.075×(A2-A1＋0.1778)÷W

(2) 按照蛋白质含量计算

      单位定义：

      每mg组织蛋白每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活性单位。

      α-淀粉酶活性(mg/min/mg prot)= [(A2-A1＋0.1778)÷3.7215×V反总]÷(V样×Cpr)÷T=0.1075×(A2-A1＋0.1778) ÷Cpr

(3) 血清(浆)等液体样本中 α-淀粉酶活性计算

      单位定义：

      每mL血清（浆）每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活性单位。

      α-淀粉酶活性(mg/min/mL)= [(A2-A1＋0.1778)÷3.7215×V反总]÷V样÷T=0.1075×(A2-A1＋0.1778)

3、总淀粉酶活性计算：

(1) 按照样品质量计算

      单位定义：

      每g组织每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活力单位。

      总淀粉酶活性(mg/min//g鲜重)=5×[(A4-A3＋0.1778)÷3.7215×V反总]÷W×V样÷V样总)÷T=5.375×(A4-A3 +0.1778)÷W

(2) 按照蛋白质含量计算

      单位定义：

      每mg组织蛋白每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活力单位。

      总淀粉酶活性(mg/min/mg prot)=5×[(A4-A3＋0.1778)÷3.7215×V反总]÷(V样×Cpr)÷T=0.5375×(A4-A3＋0.1778)÷Cpr

(3) 血清(浆)等液体样本中总淀粉酶活性计算

      单位定义：

      每mL血清(浆)每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活性单位。

      总淀粉酶活性(mg/min/mL)=5×[(A4-A3＋0.1778)÷3.7215×V反总]÷V样÷T=0.5375×(A4-A3＋0.1778)

4、β-淀粉酶活性计算：

(1) 按照样本质量计算

      单位定义：

      每g组织在反应体系中每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活力单位。

      β- 淀粉酶活性(mg/min/g鲜重)=淀粉酶总活性-α- 淀粉酶活性=[5.375×(A4-A3＋0.1778)-1.075×(A2-A1+0.1778)]÷W

(2) 按照蛋白质含量计算

      单位定义：

      每mg组织蛋白每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活力单位。

      β-淀粉酶活性(mg/min/mg prot)=淀粉酶总活性-α-淀粉酶活性=[0.5375×(A4-A3＋0.1778)-0.1075×(A2-A1+0.1778)]÷Cpr

(3) 血清(浆)等液体样本中β-淀粉酶活性计算

      单位定义：

      每mL血清(浆)每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活性单位。

      β-淀粉酶活性(mg/min/mL)=淀粉酶总活性-α-淀粉酶活性=0.5375×(A4-A3＋0.1778)-0.1075×(A2-A1+0.1778)5:总淀粉酶稀释

      倍数；V 反总：反应体系总体积，0.5mL；V 样：加入反应体系中样本体积，0.25 mL；V样总：提取液总体积，10 mL； Cpr：样

      本蛋白质浓度, mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间，5min。