β-淀粉酶(β-AL)检测试剂盒 ; 100管/48样
测定意义：
淀粉酶负责水解淀粉，主要包括 α-淀粉酶和 β-淀粉酶。β-淀粉酶(EC 3.2.1.2)可随机地作用于淀粉中的 α-1,4-糖苷键，生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖。
测定原理：
还原糖还原 3,5-二硝基水杨酸生成棕红色物质。α-淀粉酶不耐酸，β-淀粉酶不耐热。根据上述特性，钝化其中之一，就可测出另一种淀粉酶的活力。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：30mL×1瓶，常温保存，若有黄色晶体析出，需90℃加热溶解后再用；
试剂二：15mL×1瓶，4℃保存，若有沉淀析出，需 70℃加热后再用。
粗酶液制备：
组织：称取0.1~0.2g样本（建议称取约0.1g样本），加入1mL蒸馏水，研磨匀浆；将匀浆倒入离心管中，提取液在室温下放置提取15min ，每5min振荡1次，使其充分提取；3000g ，25℃离心10min，取上清液加蒸馏水定容至10mL，摇匀，即淀粉酶原液。吸取上述淀粉酶原液1mL ，加入4mL蒸馏水，摇匀，即为淀粉酶稀释液，用于 (α+β) 淀粉酶总活力的测定。
血清(浆)等液体样本：
(1) 直接检测 α-淀粉酶。
(2) 吸取淀粉酶原液1mL，加入4mL蒸馏水，摇匀，即为淀粉酶稀释液，用于(α+β)淀粉酶总活力的测定
测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长到540nm，蒸馏水调零。
2、试剂一和试剂二 40℃预热10min。
3、测定操作表
试剂名称(μL） | α-淀粉酶活力测定 | 总淀粉酶活力测定 |
淀粉酶原液 | 对照管 | 测定管 | 对照管 | 测定管 |
75 | 75 | | |
70℃水浴 15min 左右，冷却 |
淀粉酶稀释液 | | | 75 | 75 |
蒸馏水 | 75 | | 75 | |
试剂二 | | 75 | | 75 |
在 40℃恒温水浴中准确保温5min |
试剂一 | 150 | 150 | 150 | 150 |
混匀，95 度水浴 5min ，冷却，取 200μL 至微量石英比色皿或96孔板中，540nm 处读取吸光值，从左到右分别记为 A1 、A2 、A3 和 A4。每个测定管需设一个对照管。 |
酶活性计算：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、标准条件下：
测定回归曲线为y=3.7215x -0.1778 ； x 为标准品浓度(mg/mL)，y为吸光值。
2、α-淀粉酶活性：
(1) 按照样本质量计算
单位定义：
每g组织每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活力单位。
α-淀粉酶活性(mg/min/g 鲜重)=[(A2-A1＋0.1778)÷3.7215×V反总]÷(W×V样÷V样总)÷T=1.075×(A2-A1＋0.1778)÷W
(2) 按照蛋白质含量计算
单位定义：
每mg组织蛋白每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活性单位。
α-淀粉酶活性(mg/min/mg prot)= [(A2-A1＋0.1778)÷3.7215×V反总]÷(V样×Cpr)÷T=0.1075×(A2-A1＋0.1778) ÷Cpr
(3) 血清(浆)等液体样本中 α-淀粉酶活性计算
单位定义：
每mL血清（浆）每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活性单位。
α-淀粉酶活性(mg/min/mL)= [(A2-A1＋0.1778)÷3.7215×V反总]÷V样÷T=0.1075×(A2-A1＋0.1778)
3、总淀粉酶活性计算：
(1) 按照样品质量计算
单位定义：
每g组织每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活力单位。
总淀粉酶活性(mg/min//g鲜重)=5×[(A4-A3＋0.1778)÷3.7215×V反总]÷W×V样÷V样总)÷T=5.375×(A4-A3 +0.1778)÷W
(2) 按照蛋白质含量计算
单位定义：
每mg组织蛋白每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活力单位。
总淀粉酶活性(mg/min/mg prot)=5×[(A4-A3＋0.1778)÷3.7215×V反总]÷(V样×Cpr)÷T=0.5375×(A4-A3＋0.1778)÷Cpr
(3) 血清(浆)等液体样本中总淀粉酶活性计算
单位定义：
每mL血清(浆)每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活性单位。
总淀粉酶活性(mg/min/mL)=5×[(A4-A3＋0.1778)÷3.7215×V反总]÷V样÷T=0.5375×(A4-A3＋0.1778)
4、β-淀粉酶活性计算：
(1) 按照样本质量计算
单位定义：
每g组织在反应体系中每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活力单位。
β-淀粉酶活性(mg/min/g鲜重)=淀粉酶总活性-α-淀粉酶活性=[5.375×(A4-A3＋0.1778)-1.075×(A2-A1+0.1778)]÷W
(2) 按照蛋白质含量计算
单位定义：
每mg组织蛋白每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活力单位。
β-淀粉酶活性(mg/min/mg prot)=淀粉酶总活性-α-淀粉酶活性=[0.5375×(A4-A3＋0.1778)-0.1075×(A2-A1+0.1778)]÷Cpr
(3) 血清(浆)等液体样本中β-淀粉酶活性计算
单位定义：
每mL血清(浆)每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活性单位。
β-淀粉酶活性(mg/min/mL)=淀粉酶总活性-α-淀粉酶活性=0.5375×(A4-A3＋0.1778)-0.1075×(A2-A1+0.1778)5:总淀粉酶稀释
倍数；V 反总：反应体系总体积，0.5mL；V 样：加入反应体系中样本体积，0.25 mL；V样总：提取液总体积，10 mL； Cpr：样
本蛋白质浓度, mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间，5min。
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
1、标准条件下：
测定回归曲线为 y=2.481x -0.1778 ； x 为标准品浓度（mg/mL），y 为吸光值。
2、α-淀粉酶活性：
(1) 按照样本质量计算
单位定义：
每g组织每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活力单位。
α-淀粉酶活性(mg/min/g鲜重)=[(ΔA＋0.1778)÷2.481×V反总]÷(W×V样÷V样总)÷T=1.612×(ΔA＋0.1778)÷W
(2) 按照蛋白质含量计算
单位定义：
每mg组织蛋白每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活性单位。
α-淀粉酶活性(mg/min/mg prot)=[(ΔA＋0.1778)÷2.481×V反总]÷(V 样×Cpr)÷T =0.1612×(ΔA＋0.1778)÷Cpr
(3) 血清(浆)等液体样本中 α-淀粉酶活性计算
单位定义：
每mL血清(浆)每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活性单位。
α-淀粉酶活性(mg/min/mL)=[(ΔA＋0.1778)÷2.481×V反总]÷V样÷T=0.1612×(ΔA＋0.1778)
3、总淀粉酶活性计算：
(1) 按照样本质量计算
单位定义：
每g组织每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活力单位。
总淀粉酶活性(mg/min/g鲜重)=5×[(A4-A3＋0.1778)÷2.481×V反总]÷(W×V样÷V样总)÷T=8.06×(ΔA＋0.1778)÷W
(2) 按照蛋白质含量计算
单位定义：
每mg组织蛋白每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活力单位。
总淀粉酶活性(mg/min/mg prot)=5×[(A4-A3＋0.1778)÷2.481×V反总]÷(V样×Cpr)÷T=0.806×(A4-A3＋0.1778)÷Cpr
(3) 血清(浆)等液体样本中总淀粉酶活性计算
单位定义：
每mL血清(浆)每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活性单位。
总淀粉酶活性(mg/min/mL)=5×[(A4-A3＋0.1778)÷2.481×V反总]÷V样÷T=0.806×(A4-A3＋0.1778)
4、β-淀粉酶活性计算：
(1) 按照样本质量计算
单位定义：
每g组织在反应体系中每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活力单位。
β-淀粉酶活性(mg/min/g 鲜重)= 淀粉酶总活性-α-淀粉酶活性=[8.06×(A4-A3＋0.1778)-1.612×(A2-A1 +0.1778)]÷W
(2) 按照蛋白质含量计算
单位定义：
每mg组织蛋白每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活力单位。
β-淀粉酶活性(mg/min/mg prot)=淀粉酶总活性-α-淀粉酶活性=[0.806×(A4-A3＋0.1778)-0.1612×(A2-A1+0.1778)÷Cpr
(3) 血清(浆)等液体样本中 β-淀粉酶活性计算
单位定义：
每mL血清(浆)每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活性单位。
β-淀粉酶活性(mg/min/mL)=淀粉酶总活性-α-淀粉酶活性=0.806×(A4-A3＋0.1778)-0.1612×(A2-A1＋0.1778)5：总淀粉酶稀释
倍数；V 反总：反应体系总体积，0.15mL；V 样：加入反应体系中样本体积，0.075 mL； V 样总：提取液总体积，10 mL； Cpr:
样本蛋白质浓度,mg/mL ；W：样本质量，g ；T：反应时间， 5min。
