胆碱酯酶(CHE)检测试剂盒 ; 50管/48样
测定原理:
血液及组织中CHE使乙酰胆碱水解成胆碱和乙酸,未被分解的剩余乙酰胆碱与羟胺作用生成乙酰羟胺,再与铁离子在酸性溶液中形成棕色复合物,根据颜色深浅推算出酶的活力。
试剂组成与配制:
试剂一:溶液 60ml×1瓶,室温保存6个月。
试剂二:乙酰胆碱粉剂×1支,-20℃保存6个月,稀释液5ml×1瓶,4ºC保存 6个月。
80mol/ml 乙酰胆碱底物贮备液的配制:将1支乙酰胆碱粉剂倒入5ml稀释液中溶解,4ºC 保存。
8mol/ml乙酰胆碱应用液的配制:按贮备液︰试剂一 = 1 ︰ 9 的比例进行稀释,现用现配,用多少配多少。
试剂三:甲粉×1支;乙液30 ml×1瓶;丙液 30 ml×1瓶;室温保存6个月。
试剂三应用液的配制:每次测试前将甲粉倒入乙液中,充分摇匀,根据需要量将甲乙混合液与丙液等量混合,充分混匀,配成试剂三应用液,现用现配。
试剂四:溶液30ml×1瓶,室温保存 6个月。
试剂五:溶液20ml×1瓶,室温保存 6个月。
试剂六:粉剂×1瓶,稀释液 30ml×1瓶, 4℃避光保存 6个月。测试前将稀释液倒入粉剂中,充分混匀溶解后备用。
操作过程:
(一)、血清(浆)、组织的测定:
1、样本前处理:样本处理详见说明书或本公司官网-技术文章部分关于样本处理的说明。测定组织和细胞同时需要测定蛋白浓度。可用总蛋白定量测试盒(考马斯亮蓝法)或者总蛋白定量测试盒(BCA 法)进行蛋白浓度的测定。
2、操作表:
| 空白管 | 对照管 | 测定管 |
待测样本(ml) | | | 0.05 |
双蒸水(ml) | 0.30 | 0.05 | |
8mol/ml乙酰胆碱应用液(ml) | | 0.25 | 0.25 |
试剂一(ml) | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
混匀,37℃水浴 20分钟 |
试剂三应用液(ml) | 1.0 | 1.0 | 1.0 |
试剂四(ml) | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
试剂五(ml) | 0.25 | 0.25 | 0.25 |
试剂六(ml) | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
混匀,3500转/分离心10分钟,取上清,520nm ,1cm光径,空白管调零,测各管吸光值。 |
3、血清样本计算:
①、单位定义:
每毫升血清在37C和底物作用20分钟,分解1mol乙酰胆碱为1个活力单位。
②、计算公式:
4、组织中CHE的计算:
①、单位定义:
每毫克蛋白的组织在37C和底物作用20分钟,分解1mol乙酰胆碱为1 个活力单位。
2、计算公式:

(二)、全血的测定:
1、样本前处理:轻轻颠倒肝素抗凝全血使之均匀后取0.1ml,再加入0.4ml冷双蒸水,充分混匀1分钟,静置15分钟,制备的5倍溶血液对光观察澄清透亮待测。
2、操作表:
| 空白管 | 对照管 | 测定管 |
待测样本(ml) | | | 0.1 |
双蒸水(ml) | 0.35 | 0.25 | |
8mol/ml乙酰胆碱应用液(ml) | | 0.25 | 0.25 |
试剂一(ml) | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
混匀,37℃水浴20分钟 |
试剂三应用液(ml) | 1.0 | 1.0 | 1.0 |
试剂四(ml) | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
试剂五(ml) | 0.25 | 0.25 | 0.25 |
试剂六(ml) | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
待测样本(ml) | | 0.1 | |
混匀,3500转/分离心10分钟,取上清,520nm,1cm光径,空白管调零,测各管吸光值。 |
3、计算及举例:
①、单位定义:
每毫升全血在37 C和底物作用20分钟,分解1mol乙酰胆碱为1个活力单位。
②、计算公式:
