α-淀粉酶(α-AL)检测试剂盒 ; 50管/24样

α-淀粉酶(α-AL)检测试剂盒 ; 50管/24样

测定意义： 

淀粉酶负责水解淀粉，包括 α-淀粉酶和 β-淀粉酶。α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)可随机地作用于淀粉中的 α-1,4-糖苷键，生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖，同时使淀粉的粘度降低，因此又称为液化酶。

测定原理： 

还原糖还原3,5-二硝基水杨酸生成棕红色物质。β-淀粉酶不耐热，在 70℃钝化 15min，从而测定α-淀粉酶活性。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、玻璃比色皿、研钵和蒸馏水。

试剂组成和配制：

试剂一：25mL×1瓶，常温保存，若有黄色晶体析出，需90℃加热溶解后再用；

试剂二：20mL×1瓶，4℃保存，若有沉淀析出，，需70℃加热溶解后再用。

粗酶液制备：

组织：称取 0.1~0.2g 样本（建议称取约0.1g样本），加1 mL蒸馏水匀浆；将匀浆倒入离心管中，在室温下放置提取15min ，每隔5min 振荡1次，使其充分提取；3000g ，25℃离心10min，吸取上清液并且加蒸馏水定容至10 mL，摇匀，即为淀粉酶原液。

血清(浆)：直接检测。

操作步骤和加样表(在1.5mLEP管中依次加入下列试剂)：

1、分光光度计预热30min以上，调节波长到540 nm，蒸馏水调零直接检测 α-淀粉酶。

2、试剂一或试剂二40℃预热10min

3、测定步骤

α-淀粉酶活性计算：

1、标准条件下：

      测定回归曲线为 y=3.7215x -0.1778 ； x 为标准品浓度(mg/mL)，y 为吸光值

2、α-淀粉酶活性：

(1) 按照样本质量计算

      单位定义：

      每g组织每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活力单位。

      α-淀粉酶活性(mg/min/g鲜重)=[(ΔA＋0.1778)÷3.7215×V反总]÷(W×V样÷V样总)÷T=1.075×(ΔA +0.1778)÷W

(2) 按照蛋白质含量计算

      单位定义：

      每mg组织蛋白每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活性单位。

      α-淀粉酶活性(mg/min/mg prot)= [(ΔA＋0.1778)÷3.7215×V反总]÷(V样×Cpr)÷T=0.1075×(ΔA＋0.1778)÷Cpr

(3) 血清(浆)样本中 α-淀粉酶活性计算

      单位定义：

      每mL血清(浆)每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活性单位。

      α-淀粉酶活性(mg/min/mL)= [(A2-A1＋0.1778)÷3.7215×V反总]÷V样÷T=0.1075×(A2-A1＋0.1778)V 反总：反应体系总体积，

      0.5mL；V 样：加入反应体系中样本体积，0.25 mL；V 样总：提取液总体积，10 mL； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样

      本质量,g；T：反应时间，5min。