α-淀粉酶(α-AL)检测试剂盒 ; 100管/48样
测定意义：
淀粉水解酶，包括 α-淀粉酶和 β-淀粉酶。α-AL (EC 3.2.1.1)随机催化淀粉中 α-1,4-糖苷键水解，生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖，同时使淀粉的粘度降低，因此又称为液化酶。
测定原理：
淀粉水解酶催化淀粉水解生成还原糖，还原糖还原 3,5-二硝基水杨酸生成棕红色物质，在540nm有吸收峰；通过测定540nm吸光度增加速率，计算淀粉酶活性。α-AL 耐热，但是 β-淀粉酶可在70℃钝化15min。因此粗酶液经过70℃钝化15min ，就只有α-AL 能够催化淀粉水解。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体15mL×瓶，室温保存。若有黄色晶体析出，可90℃加热溶解后再用。
试剂二：液体7.5mL×1瓶，4℃保存。若有沉淀析出，可 70℃加热溶解后使用。
粗酶液提取：
组织：称取 0.1~0.2g 样本（建议称取约0.1g样本），加1 mL蒸馏水匀浆；将匀浆倒入离心管中，在室温下放置提取15min ，每隔5min 振荡1次，使其充分提取；3000g ，25℃离心10min，吸取上清液并且加蒸馏水定容至10 mL，摇匀，即为淀粉酶原液。
血清(浆)：直接检测。
操作步骤和加样表(在1.5mLEP管中依次加入下列试剂)：
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长到540nm，蒸馏水调零。
2、试剂一或试剂二40℃预热10min
3、测定步骤
试剂(μL） | 对照管 | 测定管 |
α-淀粉酶原液 | 75 | 75 |
70℃水浴 15min 左右，冷却 |
蒸馏水 | 75 | |
试剂二 | | 75 |
在 40℃恒温水浴中准确保温5min |
试剂一 | 150 | 150 |
混匀，95 度水浴 5min ，冷却，取 200 μL 至微量石英比色皿或 96 孔板中，540nm 处读取吸光值，计算ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管需设一个对照管。 |
α-淀粉酶活性计算：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、标准条件下：
测定回归曲线为 y=3.7215x -0.1778 ； x 为标准品浓度(mg/mL)，y 为吸光值
2、α-淀粉酶活性：
(1) 按照样本质量计算
单位定义：
每g组织每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活力单位。
α-淀粉酶活性(mg/min/g鲜重)=[(ΔA＋0.1778)÷3.7215×V反总]÷(W×V样÷V样总)÷T=1.075×(ΔA +0.1778)÷W
(2) 按照蛋白质含量计算
单位定义：
每mg组织蛋白每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活性单位。
α-淀粉酶活性(mg/min/mg prot)= [(ΔA＋0.1778)÷3.7215×V反总]÷(V样×Cpr)÷T=0.1075×(ΔA＋0.1778)÷Cpr
(3) 血清(浆)样本中 α-淀粉酶活性计算
单位定义：
每mL血清(浆)每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活性单位。
α-淀粉酶活性(mg/min/mL)= [(A2-A1＋0.1778)÷3.7215×V反总]÷V样÷T=0.1075×(A2-A1＋0.1778)反总：反应体系总体积，
0.15mL；V 样：加入反应体系中样本体积，0.075 mL；V 样总：提取液总体积，10 mL； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：
样本质量,g；T：反应时间，5min。
b. 用96孔板测定的计算公式如下
1、标准条件下：
测定回归曲线为y=2.481x -0.1778 ； x 为标准品浓度（mg/mL），y 为吸光值。
2、α-淀粉酶活性：
(1) 按照样本质量计算
单位定义：
每g组织每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活力单位。
α-淀粉酶活性(mg/min/g鲜重)=[(ΔA＋0.1778)÷2.481×V反总]÷(W×V样÷V样总)÷T=1.612×(ΔA＋0.1778)÷W
(2) 按照蛋白质含量计算
单位定义：
每mg组织蛋白每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活性单位。
α-淀粉酶活性(mg/min/mg prot)=[(ΔA＋0.1778)÷2.481×V 反总]÷(V样×Cpr)÷T=0.1612×(ΔA＋0.1778)÷Cpr
(3) 血清(浆)样本中 α-淀粉酶活性计算
单位定义：
每mL血清(浆)每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活性单位。
α-淀粉酶活性(mg/min/mL)= [(ΔA＋0.1778)÷2.481×V反总]÷V样÷T=0.1612×(ΔA＋0.1778)V 反总：反应体系总体积，0.15mL
V 样：加入反应体系中样本体积，0.075mL；V 样总：提取液总体积， 10 mL； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量
g；T：反应时间，5min。
