淀粉磷酸化酶(SP)检测试剂盒 ; 100管/96样
测定意义：
淀粉磷酸化酶（Starch Phosphorylase ，SP）是淀粉代谢过程唯一的可逆反应酶，既可催化淀粉的合成，也可催化淀粉的分解。在高等植物中，淀粉磷酸化酶（合成方向）主要存在于质体中，负责延长淀粉的 α-1,4-葡萄糖链的非还原末端；淀粉磷酸化酶（分解方向）主要存在于细胞质基质中，催化淀粉中的 α-1,4-糖苷键磷酸解产生葡萄糖-1-磷酸，负责葡萄糖链的磷酸解，是淀粉代谢过程中的关键酶。在植物体中，淀粉磷酸化酶分解方向的底物无机磷浓度比合成方向的底物葡萄糖-1-磷酸浓度几乎高了两个数量级，一般认为淀粉磷酸化酶只催化淀粉的分解，因此，分解方向的淀粉磷酸化酶具有重要测定意义。
测定原理：
淀粉磷酸化酶催化淀粉中的 α-1,4-糖苷键与无机磷反应产生葡萄糖-1-磷酸，葡萄糖-1-磷酸在磷酸葡萄糖变位酶的作用下产生葡萄糖-6-磷酸，并在 6-磷酸葡萄糖脱氢酶催化下还原 NADP+产生 NADPH，使 340nm下吸光值增加。
需自备的仪器和用品：
酶标仪、台式离心机、可调式移液器、96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：100mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体20mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前加入1.5mL水溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存；
试剂三：粉剂×1支，-20℃保存；临用前加入1.5mL水溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存。
样本的前处理：
1、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1 ：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后 10000g ，4℃,离心 10min，取上清待测。
2、细菌、真菌：按照细胞数量(10⁴个)：提取液体积(mL)为 500~1000 : 1的比例（建议 500 万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3 秒，间隔7秒，总时间 3min）；然后 10000g， 4℃,离心 10min，取上清置于冰上待测。
测定步骤：
1、酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm；
2、工作液的配制：临用前按照样本量将试剂一、试剂二、试剂三按照170μL:10μL:10μL 的比例混合，临用前配制，半小时内使用。
3、在96孔板中加入10μL样本和190μL工作液，立即混匀，记录340nm处1min时的吸光值 A1和 6min时的吸光值 A2，计算 ΔA=A2-A1。
P 活性计算：
(1) 按样本蛋白浓度计算
单位定义：
每mg组织蛋白每分钟产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
SP(nmol/min/mg prot)=[ ΔA×V反总÷(ε×d）×10⁹]÷(V 样×Cpr)÷T=1286×ΔA÷Cpr
(2) 按样本鲜重计算
单位定义：
每 g组织每分钟产生 1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
SP(nmol/min/g鲜重)=[ ΔA×V反总÷(ε×d）×10⁹]÷(W×V样÷V样总)÷T=1286×ΔA÷W
(3) 按样本鲜重计算
单位定义：
每万个细胞每分钟产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
SP(nmol/min/10⁴ cell)=[ΔA×V反总÷ (ε×d）×10⁹]÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T =2.572×ΔA÷WV 反总：反应体系总体积，2×
10-⁴L； ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22×10³L/mol /cm；d：96孔板光，0.5cm ；V样：加入样本体积，0.01 mL；V样总:加入
体积，1 mL。
