分型巯基(-SH)检测试剂盒/24T
测定原理:
5 ,5 ’-二硫代双,2-硝基苯甲酸(DTNB)与巯基化合物反应时能产生一种黄色化合物,可进行比色定量测定。
试剂的组成与配制:
试剂一:标准品粉剂,3支,4℃密封保存 6个月。
10mmol/L 标准品贮备液的配制:每次测定前将1支标准品粉剂加1ml试剂三-缓冲液溶解,即为10mmol/L标准品贮备液,4℃密封保存。
500μmol/L的标准应用液的配制:10mmol/L 标准品∶试剂三-缓冲液=1 ∶ 19 即20 倍稀释配成应用液,按所需量现用现配。
试剂二:透明剂,2ml×1瓶,4℃密封保存 12个月
试剂三:缓冲液,20ml×1瓶,4℃密封保存 6个月。
试剂四:显色剂,3ml×1瓶,4℃避光保存 6个月。
工作液一的配制:按透明剂∶缓冲液∶显色剂=1 ∶50∶25 的比例混合,用多少配多少。
工作液二的配制:按透明剂∶缓冲液=1 ∶75的比例混合,用多少配多少。
试剂五:沉淀剂,10ml×1瓶,室温保存6个月。
所需仪器:
单道移液器:可进行单孔的加样工作
多道移液器:可进行 8 或 12 孔的加样工作
酶标仪:用于微量样品比色分析,吸光度值测定
96 孔酶标板:用于比色的孔板(本所赠送)
操作步骤:
1、样本前处理:样本处理详见说明书。测定组织和细胞同时需要测定蛋白浓度。可用总蛋白定量测试盒(考马斯亮蓝法)或者总蛋白定量测试盒(BCA 法)进行蛋白浓度的测定。
2、操作表:
总巯基测定操作表
总SH空白孔
总SH标准孔
总SH测定孔
总SH对照孔
试剂三(μl)
10
500μmol/L 标准(μl)
总 SH 待测样本(μl)
工作液一 (μl)
150
工作液二(μl)
轻轻摇动孔板,静置5分钟,405nm波长,用酶标仪测定各孔吸光度OD值(30分钟内完成比色)
非蛋白巯基测定操作表
非蛋白SH空白孔
非蛋白SH标准孔
非蛋白SH测定孔
非蛋白SH对照孔
500μmol/L标准(μl)
总SH待测样本(μl)
(一)、血清(浆)中巯基计算公式:
(二)、组织中巯基计算公式: