蔗糖合成酶(分解方向 SS-Ⅰ)检测试剂盒 ; 100管/48样
测定意义：
蔗糖是源（叶片等）光合产物向“库”器官运输的主要形态。蔗糖合成酶（Sucrose Synthase, EC 2.4.1.13 ）是双向反应酶，既可催化蔗糖合成又可催化蔗糖分解，是蔗糖代谢的关键酶之一。研究其分解方向 SS- Ⅰ的活性对于植物蔗糖降解以及淀粉合成具有重要意义。
测定原理：
SS- Ⅰ催化蔗糖和UDP生成游离果糖和UDPG，采用3,5－二硝基水杨酸法测定还原糖的含量来反映酶活性的高低。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、离心机、移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰
试剂组成和配制：
提取液：液体100mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体10mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：液体5mL×1瓶，4℃保存；
试剂三：粉剂×2支，-20℃保存；临用前每支加入1.2mL试剂二充分溶解待用，现配现用；试剂四：液体6mL×1瓶，4℃保存。
样品测定的准备：
按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为 1 ：5~10 的比例（建议称取约0.1g组织，加入 1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 540nm，蒸馏水调零。
2、样本测定，(在 EP 管中依次加入下列试剂)：
试剂名称(μL） | 测定管 | 对照管 |
样本 | 10 | 10 |
试剂一 | 40 | |
试剂二 | | 40 |
混匀，30℃准确水浴 30min 后，95℃水浴 10min |
试剂三 | 50 | 50 |
95℃水浴 5min 左右，冷却至室温 |
蒸馏水 | 400 | 400 |
混匀，取 200μL 至微量石英比色皿或 96 孔板中，540nm 下测定各管吸光值。ΔA=A 测定-A 对照。每个测定管需要设一个对照管。 |
SS-Ⅰ活性计算：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、标准条件下：
测定回归方程为 y = 0.0012x - 0.0492；x 为标准品浓度(μg/mL)，y 为ΔA。
2、按照蛋白浓度计算：
单位定义：
每mg组织蛋白每分钟催化产生1μg还原糖定义为一个酶活力单位。
SS-Ⅰ活性(μg /min/mg prot)=[(ΔA+0.0492)÷0.0012×V 反总]÷(V样×Cpr) ÷T=138.9×(ΔA+0.0492)÷Cpr
3、按照样本鲜重计算：
单位定义：
每g组织每分钟催化产生1μg还原糖定义为一个酶活力单位。
SS-Ⅰ活性(μg /min/g鲜重)=[(ΔA+0.0492)÷0.0012×V反总]÷(W×V样÷V样总)÷T=138.9×(ΔA+0.0492)÷WV 反总：反应体系总
体积，0.05mL；V样:加入样本体积，0.01mL；V样总:加入提取液体积，1mL；T:反应时间，30min；Cpr:样本蛋白质浓度，mg/
mL；W:样本质量，g。
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
1、标准条件下：
测定回归方程为 y = 0.0006x - 0.0492；x 为标准品浓度(μg/mL），y 为ΔA。
2、按照蛋白浓度计算：
单位定义：
每mg组织蛋白每分钟催化产生1μg 还原糖定义为一个酶活力单位。
SS-Ⅰ活性(μg /min/mg prot)= (ΔA+0.0492)÷0.0006×V反总]÷(V样×Cpr)÷T=277.8×(ΔA+0.0492)÷Cpr
3、按照样本鲜重计算：
单位定义：
每g组织每分钟催化产生1μg还原糖定义为一个酶活力单位。
SS-Ⅰ活性(μg /min/g鲜重) =(ΔA+0.0492)÷0.0006×V反总]÷(W×V样÷V样总)÷T=277.8×(ΔA+0.0492)÷WV 反总：反应体系总
体积，0.05mL；V样：加入样本体积，0.01 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，30 min；Cpr:样本蛋白质浓度,
mg/mL；W：样本质量，g
