细胞壁不溶性酸性转化酶(B-AI)检测试剂盒 ; 50管/24样
测定意义：
蔗糖转化酶（Invertase ，Ivr）催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖，是高等植物蔗糖代谢关键酶之一。根据最适 pH ，Ivr 分为酸性转化酶（AI）和中性转化酶（NI）两种类型。AI 的最适 pH 为 3～5 。AI 分为可溶性 AI(S-AI)和细胞壁不溶性 AI（B-AI）两种类型。B-AI 存在于细胞间隙并结合在细胞壁上，主要参与韧皮部质外体卸载时蔗糖的分解，以维持库源之间蔗糖的浓度。
测定原理：
B-AI 催化蔗糖降解产生还原糖，进一步与 3,5－二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物，在 510nm 有特征光吸收，在一定范围内 510nm 光吸收增加速率与 B-AI 活性成正比。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液1：液体50mL×1瓶，4℃保存；
提取液2：液体 50mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体50mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入25mL试剂一充分溶解备用；用不完的试剂 4℃保存；
试剂三：液体30mL×1瓶，4℃保存；
粗酶液提取：
按照组织质量(g)：提取液1体积(mL)为1 ：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL 提取液1），进行冰浴匀浆。12000g 4℃离心 10min ，弃上清，沉淀中加入1mL蒸馏水，充分震荡混匀，12000g 4℃离心10min ，弃上清，沉淀中加入1mL提取液2 充分混匀，4℃浸提过夜，12000g 4℃离心20min ，取上清置冰上待测。
测定步骤和加样表：
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 540nm，蒸馏水调零。
2、样本测定，(在 EP 管中依次加入下列试剂)：
试剂名称(μL） | 测定管 | 对照管 |
样本 | 200 | 200 |
试剂一 | | 800 |
试剂二 | 800 | |
混匀， 37℃准确水浴 30min 后，95℃水浴 10min（盖紧，以防水分散失），流水冷却后充分混匀（以保证浓度不变） |
试剂三 | 500 | 500 |
混匀，95℃水浴 10min（盖紧，以防止水分散失），流水冷却后充分混匀， 510nm 处，蒸馏水调零，记录各管吸光值 A ，如果吸光值大于 2 ，可以用蒸馏水稀释后测定(计算公式中乘以相应稀释倍数) ，ΔA=A 测定-A 对照。 |
B-AI 活性计算：
标准条件下测定的回归方程为y=0.0016x -0.001 ；x为标准品浓度(μg/mL)，y为吸光值。
(1) 按蛋白浓度计算
单位的定义：
37℃每 mg 蛋白每分钟产生 1μg 还原糖定义为一个酶活性单位。
B-AI 活性(μg/min/mg prot)＝[(ΔA +0.001)÷0.0016×V1]÷(V1×Cpr )÷T=20.8×(ΔA +0.001) ÷Cpr
(2) 按鲜重计算
单位的定义：
37℃每 g 组织每分钟产生 1μg 还原糖定义为一个酶活性单位。
B-AI 活性(μg/min/g 鲜重）＝[(ΔA +0.001)÷0.0016×V1]÷(W×V1÷V2) ÷T =20.8×(ΔA +0.001)÷WV1：加入反应体系中样本体
积，0.2mL；V2：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，30min； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g。
