蔗糖磷酸化酶(SP)检测试剂盒 ; 50管/48样
测定意义：
SP(EC2.4.1.7)主要存在于微生物和植物中，裂解葡萄糖苷键，催化葡萄糖基转移到果糖、木糖、半乳糖和鼠李糖等，合成相应的葡萄糖基低聚糖。此外，SP 还能催化氢醌合成熊果苷，具有极强的美白效果，在化妆品工业中具有重要应用。
测定原理：
SP 能够以磷酸为受体，催化蔗糖产生 1-磷酸葡萄糖，在葡萄糖磷酸变位酶催化下变位为 6-磷酸葡萄糖，在 6-磷酸葡萄糖脱氢酶作用下还原 NADP+生成 NADPH ，导致 340nm 光吸收值增加。测定 340nm 吸光度增加速率，即可计算 SP 活性。
需自备的仪器和用品：
天平、低温离心机、恒温水浴锅、紫外分光光度计、1 mL 石英比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体35mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1瓶，-20℃避光保存，临用前加6mL蒸馏水溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂三：粉剂×1瓶，-20℃避光保存，临用前加12mL蒸馏水水溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
粗酶液提取：
1、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1 ：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后 10000g ，4℃ , 离心 10min，取上清待测。
2、细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积(mL)为 500~1000 ：1 的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒， 间隔7 秒，总时间3min）；然后10000g ，4℃ , 离心10min，取上清置于冰上待测。
测定操作表：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
2、操作表
试剂名称 | 对照管 | 测定管 |
试剂一 (μL） | 600 | 600 |
试剂二(μL） | 100 | 100 |
试剂三(μL） | 200 | 200 |
样本(μL） | | 100 |
蒸馏水(μL） | 100 | |
混匀，95℃水浴 10min（盖紧，以防止水分散失），流水冷却后充分混匀，取 200μL 至微量石英比色皿或 96孔板中， 510nm 处记录各管吸光值 A，如果吸光值大于 2，可以用蒸馏水稀释后测定(计算公式中乘以相应稀释倍数) ，ΔA=A 测定-A 对照。每个测定管设一个对照管。 |
SP活性计算公式：
1、按照蛋白浓度计算：
酶活定义：
37℃ , pH6.8时，每毫克蛋白质每分钟催化产生1nmolNADPH为一个酶活单位。
2、按照样本质量计算：
酶活定义：
37℃, pH6.8 时，每克样本每分钟催化产生 1nmol NADPH 为一个酶活单位。
3、按照细胞数量计算：
ε ：NADPH 摩尔消光系数，6220 L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V 反总：反应体系总体积，1mL；V样：反应体系中样本体
积，0.1mL；W：样本质量，g；Cpr：蛋白浓度，mg/mL；V 样总：加入提取液体积， 1mL；T：反应时间，2min。
注意事项：
1、可选用 BCA 法测定蛋白含量试剂盒测定蛋白含量。
2、样本较多时，可以按照每个样本试剂一：试剂二：试剂三=600：100 ：200 (μL）的比例配制工作液，用多少配多少，临用前立刻配制，10 分钟内使用。
