肝/肌糖原检测试剂盒 ; 50管/48样
测定原理:
糖原在浓硫酸的作用下可脱水生成糖醛衍生物,后者再与蒽酮作用形成蓝色化合物,与同法处理的标准葡萄糖溶液比色定量。糖原在浓碱溶液中非常稳定,故在显色之前先将组织放入浓碱中加热以破坏其它成分而保留糖原。
试剂组成与配制:
试剂一:水解液,40ml ×1瓶,室温或 2~8℃保存 6个月。
试剂二:1mg/ml标准品贮备液,5ml ×1支,室温或2~8℃保存 6个月。
0.01mg/ml标准应用液的配制:1mg/ml标准品贮备液∶双蒸水=1∶99,现用现配。
试剂三:显色剂,粉剂×6支,室温或 2~8℃保存 6个月。用时每支加浓硫酸 25ml(浓硫酸自备),混匀,现用现配。
样本前处理:
1、 取样:取新鲜肝脏、肌肉样本用生理盐水漂洗后,滤纸吸干,称重(样本重量≤100mg 为宜,不要>100mg)。
2、水解:按样本重量(mg)∶水解液体积(μl)=1 ∶3 ,一起加入试管中,沸水浴煮20min,流水冷却。
3、将糖原水解液进一步制备成糖原检测液:
肝糖原检测液为1%,加双蒸水的量为:肝脏重量×100—肝脏重量×4*=肝脏重量×96肌糖原检测液为5%,加双蒸水的量为:肌肉重量×20—肌肉重量×4*=肌肉重量×16
注:4*为水解时碱液与组织的体积数。
例如上例:制备 1%肝糖原检测液,加双蒸水的量为:75×96=7200μl =7.2 ml ;制备 5%肌糖原检测液,加双蒸水的量为:85×16=1360μl =1.36ml。
操作表:
1、样本前处理:样本处理详见说明书。测定组织和细胞同时需要测定蛋白浓度。可用总蛋白定量测试盒(考马斯亮蓝法)或者总蛋白定量测试盒(BCA 法)进行蛋白浓度的测定。
2、操作表:
| 空白管 | 标准管 | 测定管 |
双蒸水(ml) | 1.0 | | 0.9 |
0.01mg/ml标准液(ml) | | 1.0 | |
糖原检测液(ml) | | | 0.1 |
显色液(ml) | 2 | 2 | 2 |
混匀后置沸水中煮5min,冷却后于620nm波长,1cm光径,空白管调零,测各管 OD值。 |
计算公式:
