高铁血红蛋白(MetHb)检测试剂盒 ; 100管/96样
实验仪器:
试管、微量移液器、旋涡混匀器、可见分光光度计(540 、602 和 630nm)。
适用范围:
本试剂盒可测各种动物全血等样本中高铁血红蛋白含量;
测定意义:
体内一氧化氮弥散入血后,很快与氧合血红蛋白结合形成高铁血红蛋白(methemoglobin,MetHb),NO 与MetHb 变化相关,故全血 MetHb 检测近年来受到临床的广泛重视。同时血液中高铁血红蛋白含量的测定对接触芳香族氨基、硝基化合物所引起的中毒性疾病的诊断与治疗,有重要的意义。
操作过程:
1、制备抗凝全血:取全血立即加入到肝素抗凝管内,加盖封口,轻轻颠倒混匀。
2、血红蛋白含量的测定:取0.01ml 全血与 2.5ml的100 倍稀释的试剂一应用液(血红蛋白测定应用液),混匀,静置5分钟后,1cm 光径,双蒸水调零,540nm 处测定各管吸光度值。
3、高铁血红蛋白测定:取 0.05ml全血,加入2.5ml 的试剂二稀释应用液(即高铁血红蛋白测定应用液),混匀,静置5分钟后,1cm光径,双蒸水调零,测定 630nm 处及602nm处吸光度值。如果没有双波长 的分光光度计则可以先测定各管 630nm处吸光度值,然后再测各管602 nm处吸光度值。但一定要注意各管的编号不要弄错。
计算公式:
①、血红蛋白含量的计算: 血红蛋白克数/升= 540nm 处吸光度值 × 367.7
②、高铁血红蛋白百分比计算:MetHb% = A 630nm - r× A602nm ×100%A 602nm×(R-r)
③、高铁血红蛋白含量的计算:高铁血红蛋白克数/升= MetHb% × 血红蛋白克数 / 升
【注 1】 A630 即在 630nm 波长时样本的吸光度值;A602即在602nm 波长时样本的吸光度值
【注 2】 R与 r均为常数,R=1.81;r=0.14。(本研究所测定常数)
即计算公式可以简化为:
①、高铁血红蛋白百分比:MetHb% = A 630nm - 0.14×A602nm×100% A 602nm×1.67
②、高铁血红蛋白含量的计算:高铁血红蛋白克数/升= MetHb%× 血红蛋白克数 / 升【注】64546为Hb分子量;4表示一个Hb结合四个CO