谷氨酸脱氢酶(GLDH/GDH)检测试剂盒 ; 50T/48样
测试原理:
谷氨酸脱氢酶( Glutamate dehydrogenase,GDH)催化 NH4+、α-酮戊二酸和 NADH,生成谷氨酸和NAD+,引起 340nm吸光度值下降;通过测定 340nm处吸光度的下降速率,计算GDH 活性。
自备仪器或用品:
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1ml石英比色皿、研钵、蒸馏水。
试剂盒组成:
规格
保存
提取液
液体,60ml×1瓶
4℃保存
试剂一
试剂二
粉剂×1支
粗酶液提取:
粗酶液提取详见试剂盒内说明书。测定组织和细胞同时需要测定蛋白浓度。 可用总蛋白定量测试盒(考马斯亮蓝法)或者总蛋白定量测试盒(BCA 法)进行蛋白浓度的测定。
操作步骤:
1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。
2、样本测定:
(1) 工作液配制:将试剂二中加入试剂一 50ml混合溶解,置于恒温水浴锅预温(哺乳动物 37℃;非哺乳动物 25℃) 5min,现用现配。
(2)测定:取0.95ml工作液和0.05ml待测粗酶液于试管中,混匀并立即转入1ml比色皿,于波长340nm测得 20秒时吸光度值 A1和 5分钟 20秒时的吸光度值A2,计算△ A=A1-A2。(将样本加入工作液中即进行计时)