谷氨酰胺合成酶(GS)检测试剂盒 ; 50管/24样
测试原理:
GS在ATP和Mg2+的存在下,催化铵离子和谷氨酸合成谷氨酰胺;谷氨酰胺进一步转化为γ-谷氨酰基异羟肟酸,在酸性条件下形成的络合物在540nm处有最大吸收峰,可用分光光度计测定其吸光值来判定GS的活力。
试剂组成和配置:
提取液:30ml×1瓶,4℃保存。
试剂一:12ml×1瓶,-20℃保存。使用时 37℃预热 20min,充分混匀,如有沉淀,静置 10min,取上清待用。
试剂二:12ml×1瓶,-20℃保存。使用时 37℃预热 20min,充分混匀,如有沉淀,静置 10min,取上清待用。
试剂三:粉剂×2瓶,-20℃保存。使用时每瓶粉剂加入5ml 蒸馏水充分溶解待用。
试剂四:15ml×1瓶,4℃保存。
样本前处理
1、组织:按照组织重量(g):提取液体积(ml)为1:10的比例混合后,冰水浴匀浆,4000转/min离心10min,取上清置冰上待测。
2、血清(浆):直接取样测定。
3、胞、细菌或组织样品:收集细胞或细菌于离心管中,离心后弃上清,按照细胞或 细菌数量(10⁴个):提取液体积(ml)为500 :1 的比例混合,超声波破碎细胞或细菌(条件:冰浴、功率20%或200W、超声3s、间隔10s、重复30次)后待测。
操作步骤:
| 测定管 | 对照管 |
待测样本(μl) | 175 | 1 |
试剂一(μl) | 400 | |
试剂三(μl) | | 400 |
试剂三(μl) | 175 | 175 |
混匀,37℃(动物)或25℃(其他物种)反应30min |
试剂四(μl) | 250 | 250 |
混匀,室温静置10min,4000转/min离心10min,取上清在 540nm处,1cm光径比色皿,蒸馏水调零,测各管OD值,△A=A测定-A对照 |
酶活力计算:
标准曲线为:0.8348x+0.0008 ,R2=0.9999
1、血清(浆)计算方法
单位定义:每ml血清(浆)在每ml反应体系中每小时产生1μmol的γ-谷氨酰基异羟肟酸为一个酶活力单位。
计算公式:

2、组织、细菌、细胞计算方法
(1)、按样本蛋白浓度计算
单位定义:每mg组织蛋白在每ml反应体系中每小时产生1μmol的γ-谷氨酰基异羟肟酸一
个酶活力单位。
计算公式:

(2)、按样本鲜重计算:
单位定义:每g组织在每ml反应体系中每小时产生1μmol 的γ-谷氨酰基异羟肟酸为一个酶活力单位。
计算公式:

(3)、按细菌或细胞密度计算:
单位定义:每 1 万个细胞或细菌在每ml反应体系中每小时产生1μmol的γ-谷氨酰基异羟肟酸为一个酶活力单位。
计算公式:
