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谷氨酰胺合成酶(GS)检测试剂盒 ; 50管/24样

谷氨酰胺合成酶(GS)检测试剂盒 ; 50管/24样

  • 货号:YJ49155
  • 可售卖地:全国
  • 供货:现货供应
  • 保 质 期:半年
  • 品牌:源桔生物
  • 保存温度:2-8℃
  • 检测方法:比色法
  • 分类:氧化与抗氧化系列
  • 规格:50管/24样
  • 用途:仅供科研使用
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源桔生物 YJ49155 50管/24样 ¥1200 大量 液体盒装
  • 商品详情

谷氨酰胺合成酶(GS)检测试剂盒 ; 50管/24样

测试原理: 

GS在ATP和Mg2+的存在下,催化铵离子和谷氨酸合成谷氨酰胺;谷氨酰胺进一步转化为γ-谷氨酰基异羟肟酸,在酸性条件下形成的络合物在540nm处有最大吸收峰,可用分光光度计测定其吸光值来判定GS的活力。

试剂组成和配置: 

提取液:30ml×1瓶,4℃保存。

试剂一:12ml×1瓶,-20℃保存。使用时 37℃预热 20min,充分混匀,如有沉淀,静置 10min,取上清待用。

试剂二:12ml×1瓶,-20℃保存。使用时 37℃预热 20min,充分混匀,如有沉淀,静置 10min,取上清待用。

试剂三:粉剂×2瓶,-20℃保存。使用时每瓶粉剂加入5ml 蒸馏水充分溶解待用。

试剂四:15ml×1瓶,4℃保存。

样本前处理

1、组织:按照组织重量(g):提取液体积(ml)为1:10的比例混合后,冰水浴匀浆,4000转/min离心10min,取上清置冰上待测。

2、血清(浆):直接取样测定。

3、胞、细菌或组织样品:收集细胞或细菌于离心管中,离心后弃上清,按照细胞或 细菌数量(10⁴个):提取液体积(ml)为500 :1 的比例混合,超声波破碎细胞或细菌(条件:冰浴、功率20%或200W、超声3s、间隔10s、重复30次)后待测。

操作步骤:

测定管

对照管

待测样本(μl)

175

1

试剂一(μl)

400

 

试剂三(μl)

 

400

试剂三(μl)

175

175

混匀,37℃(动物)或25℃(其他物种)反应30min

试剂四(μl)

250

250

混匀,室温静置10min,4000转/min离心10min,取上清在 540nm处,1cm光径比色皿,蒸馏水调零,测各管OD值,△A=A测定-A对照

酶活力计算:

标准曲线为:0.8348x+0.0008 ,R2=0.9999

1、血清(浆)计算方法

单位定义:每ml血清(浆)在每ml反应体系中每小时产生1μmol的γ-谷氨酰基异羟肟酸为一个酶活力单位。

计算公式:

image.png

2、组织、细菌、细胞计算方法

(1)、按样本蛋白浓度计算

单位定义:每mg组织蛋白在每ml反应体系中每小时产生1μmol的γ-谷氨酰基异羟肟酸一

个酶活力单位。

计算公式:


image.png


(2)、按样本鲜重计算:

单位定义:每g组织在每ml反应体系中每小时产生1μmol 的γ-谷氨酰基异羟肟酸为一个酶活力单位。

计算公式:


image.png


(3)、按细菌或细胞密度计算:

单位定义:每 1 万个细胞或细菌在每ml反应体系中每小时产生1μmol的γ-谷氨酰基异羟肟酸为一个酶活力单位。

计算公式:


image.png