谷氨酰胺酶(GLS)检测试剂盒 ; 50T/48样
试剂的组成和配制:
试剂一:60mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:20mL×1瓶,4℃保存。
试剂三:30mL×1瓶,常温保存。
试剂四:10mL×1瓶,常温保存。
试剂五:6mL×1瓶,常温保存。
试剂六:6mL×1瓶,常温避光保存。
样本前处理:
详见试剂盒内说明书关于样本处理的说明。测定组织、细菌和细胞时需要测定蛋白浓度。可用总蛋白定量测试盒(考马斯亮蓝法)或者总蛋白定量测试盒(BCA 法)进行蛋白浓度的测定。
测定步骤:
1、分光光度计预热 30min以上,调节波长至420nm,蒸馏水调零。
2、样品测定(在 EP管中加入下列试剂):
试剂名称(μl)
测定管
对照管
样本
25
蒸馏水
试剂一
100
试剂二
400
混匀,37℃水浴 1小时
试剂三
525
混匀,8000g、常温离心 10 min;取上清液,加入 EP 管中
上清液
650
试剂四
150
试剂五
试剂六
混匀,420nm处读取吸光值A,计算Δ A=A测定管-A对照管。对照管只要做一管。
测定原理:
GLS催化谷氨酰胺水解成L-谷氨酸和氨,利用奈氏试剂检测氨增加的速率,即可计算其酶活性。
所需的仪器和用品:
台式离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。