谷胱甘肽还原酶(GR)检测试剂盒 ; 50管/48T
测定原理:
氧化型谷胱甘肽(GSSG)在谷胱甘肽还原酶 GR 的催化下,由 NADPH 供氢,使 GSSG 还原生成还原型谷胱甘肽(GSH)后,GSH 增加,NADPH 减少。在 340nm 处可检测到 NADPH 的吸光度值的下降。 通过检测NADPH 的改变,可以计算出 GR 的活力。
+GR
GSSG + NADPH+ H ———→ 2GSH+ NADP
试剂组成(50管/48样):
试剂一:60ml ×2瓶,4℃保存 6个月。
试剂二:粉剂×4支,4℃保存 6个月;用时每支加双蒸水1ml充分溶解后备用,4℃保存。
试剂三:粉剂×2支,4℃保存 6个月;用时每支加双蒸水1ml充分溶解后备用,-20℃以下保存。
工作液的配制:按试剂一 ︰试剂二︰试剂三=2300︰60︰30的比例进行配制,用多少配多少,现用现配,余下的 4℃保存 4~5天。
血清(浆)中GR活力的测定:
①、将紫外分光光度计于340nm处,1cm光径石英比色皿,用双蒸水调零;(石英比色皿准备两只,一只用于调零,一只用于测定)。
②、往相应编号的试管中加入50μl新鲜血清(浆),吸取工作液2.4ml冲入试管中,快速混匀,并计时;
③、迅速倒入石英比色皿中,紫外分光光度计,340nm处比色,30秒时读取吸光度值A1;
④、将此比色液倒入原试管中置 37℃准确水浴2分钟,再迅速倒入石英比色皿中,2分 30
秒时读取吸光度值 A2;△
⑤、求出2次吸光度差值(A=A1-A2)。
3、血清(浆)中GR的计算:
①、单位定义:每升血清(浆)每分钟使反应体系中底物 NADPH的浓度改变1mM所需的酶量为一个酶活力单位。
②、计算公式:

6.22为1mM NADPH在340nm波长1cm 光径的消光系数。