果胶酶(Pectinase)检测试剂盒 ; 50管/24样
测定意义：
果胶酶（pectinase）是一类分解果胶质酶类的总称，包括原果胶酶，果胶酯酶，多聚半乳糖醛酸酶和果胶裂解酶四大类，广泛存在于植物果实和微生物中，主要用于食品、酿酒、环保、医药、纺织及日化用品行业。
测定原理：
果胶酶水解果胶生成半乳糖醛酸，具有还原性醛基，与 DNS 试剂反应生成红棕色物质，在 540nm 有特征吸收峰，测定 540nm 处吸光值变化可计算得果胶酶活性。
自备实验用品及仪器：
天平、低温离心机、可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿、恒温水浴锅。
试剂组成和配制：
提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 30mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×2 瓶，4℃保存；临用前加入 12.5mL 试剂一，50℃加热溶解，用不完的试剂 4℃保存一周。
试剂三：液体 30mL×1 瓶，4℃避光保存。
酶液提取：
1、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1 ：5~10的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~1000 ：1 的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w ，超声 3 秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃离心10min，取上清置于冰上待测。
3、细胞培养液等：直接检测。
测定操作表：
| 对照管 | 测定管 |
试剂二(µL） | 400 | 400 |
50℃水浴温育 5min |
样本(µL） | | 100 |
煮沸样本(µL） | 100 | |
混匀，50℃水浴反应 30min |
试剂三(µL） | 500 | 500 |
沸水浴 5min，冰浴冷却终止反应，8000g ，4℃, 离心 10min，取上清，蒸馏水调零，1mL 玻璃比色皿测定 540nm 处吸光值 A，△A=A 测定管-A 对照管。每个测定管需设一个对照管。 |
酶活性计算公式：
标准曲线：y = 3.9642x - 0.008；R²= 0.9996；x 为标准品浓度，mg/mL；y 为吸光值。
1、按照蛋白浓度计算
酶活性定义：
在50℃ , pH3.5条件下，每毫克蛋白每小时分解果胶产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位。
果胶酶活性（mg/h/mg prot）= (ΔA+0.008) ÷3.9642×V反总÷（V样×Cpr）÷T= 2.523×( ΔA+0.008)÷Cpr
2、按照样本质量计算
酶活性定义：
在 50℃ , pH3.5条件下，每克样本每小时分解果胶产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位。
果胶酶活性（mg/h /g鲜重）=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V反总÷（V 样×W÷V 样总）÷T= 2.523×( ΔA+0.008)÷W
3、按细胞数量计算
酶活性定义：
在50℃, pH3.5条件下，每 10⁴细胞每小时分解果胶产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位。
果胶酶活性（mg/h /10⁴cell）=( ΔA+0.008) ÷3.9642×V 反总÷（V样×细胞数量÷V 样总）÷T= 2.523×( ΔA+0.008)÷细胞数量
4、细胞培养液
酶活性定义：
在50℃, pH3.5条件下，每毫升培养液每小时分解果胶产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位。
果胶酶活性（mg/h /mL）=( ΔA+0.008) ÷3.9642×V 反总÷V样÷T=2.523×( ΔA+0.008)V反总：反应总体积，0.5mL；V样：反
应中样本体积，0.1mL；V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W，样本质量，g；T：反应时间，0.5h
注意事项：
1、试剂二若有沉淀析出，请置于 50℃加热溶解。
2、测定之前请先做预实验，如果吸光值较高或较低，请用提取液做适当的稀释或者加大样本量，并在计算公式中乘以稀释倍数或者以实际加入的样本体积参与计算。
3、煮沸样本建议在沸水中煮沸 10 分钟，以将酶彻底灭活。
