海藻糖酶检测试剂盒 ; 50管/24样
测定原理:
THL催化海藻糖产生葡萄糖,经葡萄糖氧化酶作用生成葡萄糖酸和过氧化氢,过氧化物酶催化过氧化氢跟4-氨基安替比林偶联酚反应生成显色物,在505nm处测定其吸光度值,反映THL的酶活性。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1ml 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水
试剂的组成和配制:
提取液:液体25ml×1瓶,4。C 保存;
试剂一:液体10ml×1瓶,4 。C 保存;
试剂二:液体25ml×1瓶,4 。C 保存;
试剂三:液体25ml×1瓶,4 。C 保存。
如果出现结冰现象可以37温浴溶解后使用。
工作液:试剂二和试剂三等比例混合,需要多少配多少,现配现用。
测定步骤:
1、样本前处理:样本提取详见试剂盒内说明书。测定组织、细菌和细胞时需要测定蛋白浓度。可用总蛋白定量测试盒(考马斯亮蓝法)或者总蛋白定量测试盒(BCA 法)进行蛋白浓度的测定。
2、检测步骤:
测定管
对照管
样本上清(μl)
90
试剂一(μl)
150
蒸馏水(μl)
45。C水浴1,准确反应 15min,95℃水浴5分钟终止反应,10000g离心10分钟取上清
上清(μl)
100
工作液(μl)
900
混匀,盖紧后95。C 水浴5min,冷却后,检测505nm吸光度,计算ΔA=A测定-A对照。