肌酸激酶(CK)检测试剂盒 ; 50管/24样
测定原理:
肌酸激酶CK催化三磷酸腺苷和肌酸,生成磷酸肌酸,后者很快全部水解为磷酸,此时三磷酸腺苷和二磷酸腺苷仍稳定,加入钼酸铵可生成磷钼酸,可进一步还原成钼蓝,根据生成无机磷的量可算出酶的活力。
试剂组成与配制:
试剂一:液体6ml×1瓶,冷冻或者4℃保存 3个月。
试剂二:液体1.5ml×1瓶,冷冻或者4℃保存3个月。
试剂三:粉剂2支,临用时每支加双蒸水2 ml ,4℃保存6个月。
试剂四:粉剂1支,临用前每支加双蒸水6ml, 4℃保存6个月。
试剂五:粉剂2支,冷冻保存6个月,临用时每支加双蒸水2ml。配好后-20℃保存5天。
试剂六:液体6ml×1瓶,室温或 4℃保存 6个月。
试剂七:粉剂×1瓶,4℃保存6个月,加双蒸水60ml,可适当加热溶解,溶解后 4℃保存。
试剂八:粉剂×2瓶,4℃保存6个月,临用时每支加双蒸水20ml,溶解后4℃保存。
试剂九:50ml×1瓶,室温保存6个月。
定磷剂的配制:试剂七︰试剂八︰双蒸水︰试剂九= 1︰1︰2 ︰1。配好的定磷剂应为浅黄色,若无色则失效,若呈蓝色则为磷污染,定磷剂需现用现配。配好后4℃保存48 小时。附赠双蒸水200ml,供配制试剂时用。
操作步骤:
1、操作表:
| 测定管 | 对照管 |
待测样本(μl) | 20 | |
试剂一(μ l) | 80 | 80 |
试剂二(μl) | 20 | 20 |
试剂三(μl) | 50 | 50 |
试剂四(μl) | 100 | 100 |
试剂五(μl) | 50 | 50 |
旋涡混匀,37。C 水浴 20分钟 |
试剂六(μl) | 100 | 100 |
待测样本(μl) | | 20 |
旋涡混匀,离心3500r/min×10min,取上清定磷 |
上清(μl) | | |
定磷剂(μl) | | |
混匀,45C水浴15分钟,双蒸水调零,660nm处1cm光径比色,测各管的吸光度值。 |
2、计算公式:
①、血清计算公式:
CK 活力 =根据标准曲线计算×样本测试前=「7.4491×(测定OD值-对照OD值)- 0.07167×样本测试前稀释倍数L」
②、组织计算公式:
CK 活力(U/mgprot)=根据标准曲线计算÷待测样本蛋白浓度(mgprot/ml)所得的 CK 酶活力(U/ml)=(7.4491×(测定OD值-对照
OD 值)- 0.0716)÷待测样本蛋白浓度(蛋白浓度可通过用本所的A045-2-1总蛋白定量考马斯亮蓝法试剂盒测定)