几丁质酶检测试剂盒 ; 50T/24样
测定原理:
几丁质酶水解几丁质产生 N-乙酰氨基葡萄糖,进一步与对二甲氨基苯甲醛产生红色化合物,在585nm处有特征吸收峰,吸光值增加速率反映了几丁质酶的活性。
自备实验用品及仪器:
天平、水浴锅、离心机、可见分光光度计、1ml玻璃比色皿、甲苯和蒸馏水。
试剂组成和配制:
提取液 液体100ml×1瓶,4℃保存
试剂一 液体10ml×1瓶,4℃保存
试剂二 液体10ml×1瓶,4℃保存
试剂三 液体10ml×1瓶,4℃保存
试剂四 液体20ml×1瓶,4℃避光保存
样本前处理:
1、粗酶液提取:按组织质量(g):提取液体积(ml)=1:9 的比例加入试剂一(如0.1g组织加入0.9ml提取液),冰水浴匀浆,10000rpm/min,离心10min,取上清待测。
测定操作表:
对照管
测定管
粗酶液(ml)
0.4
提取液(ml)
0.6
0.2
试剂一(ml)
混匀,37℃水浴1h
试剂二(ml)
混匀,沸水浴 7min,5000rpm ,4℃,离心 10min,取上清1ml
试剂三(ml)
试剂四(ml)
混匀,37℃, 15min,对照管调零,1ml比色皿,测定 A585 ,A=A 测定-A 对照