抗坏血酸氧化酶(AAO)活性检测试剂盒 ; 50T/48样
测定原理:
AAO可直接氧化AsA,通过测定AsA的氧化量,可计算得AAO活力。
仪器设备(自备):
低温离心机、紫外分光光度计、1ml石英比色皿、可调式移液器、研钵、冰、蒸馏水。
试剂组成:
试剂一:液体×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体×1瓶,4℃保存。
试剂三:粉剂×1瓶,4℃保存,临用前加入5ml蒸馏水充分溶解。
操作步骤:
1、粗酶液提取:
(1)、按照组织质量(g):提取液体积(ml)为1 :5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1ml试剂一)进行冰浴匀浆。16000g ,4℃离心 10min,取上清置冰上待测。
(2)、试剂二在 25℃水浴锅中预热 30min。
2、测定操作表:
空白管
测定管
双蒸水(μl)
缓冲液
6ml×1瓶
样本粗酶液(μl)
基质液
试剂二(μl)(已预温 30min)
显色剂
18ml×1瓶
试剂三(μl)
1.1mg/ml酚标准贮备液
0.5ml×1支
快速混匀,于波长265nm,1ml石英比色皿,双蒸水调零,分别测定10s吸光度值A10和130s 吸光度值 A130 。(ΔA=A10-A130)。