磷酸果糖激酶(PFK)检测试剂盒 ; 50T/48样
测定原理:
PFK 催化果糖-6-磷酸和ATP生成果糖-1,6-二磷酸和ADP,丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶进一步依次催化NADH氧化生成 NAD+,在340 nm下测定NADH下降速率,即可反应PFK活性。
自备仪器用品:
离心机、紫外分光光度、水浴锅、1ml石英比色皿、移液枪、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制:
提取液:60ml×1瓶, 4℃保存
试剂一:40ml×1瓶,4℃保存
试剂二:粉剂×1瓶,-20℃保存,临用前加2.8ml蒸馏水充分溶解,用不完的试剂-20℃分装保存不能反复冻融
试剂三:粉剂×1支,4℃保存,临用前加0.26ml蒸馏水充分溶解,用不完的试剂-20℃分装保存不能反复冻融
试剂四:液体×1支,4℃保存,临用前加0.26ml蒸馏水充分溶解,用不完的试剂-20℃分装保存不能反复冻融
样品前处理:
样本提取详见试剂盒内说明书。测定组织和细胞需要测定蛋白浓度。可用总蛋白定量测试盒(考马斯亮蓝法)或者总蛋白定量测试盒(BCA 法)进行蛋白浓度的测定。
测定步骤:
试剂名称(μl)
测定管
工作液
800
样本
30
试剂三
5
试剂四
将上述试剂按照顺序加入1ml石英比色皿中,立即混匀,加试剂四的同时△开始计时,记录在 340nm波长下 20秒时的初始吸光度 A1和10分 20 秒时的吸光度 A2,计算A =A1-A2