磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)检测试剂盒 ; 50T/48样
测定原理:
PEPCK催化草酰乙酸反应生成磷酸烯醇式丙酮酸与二氧化碳,丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶进一步催化 NADH生成NAD+,在340nm测定NADH减少速率,从而计算PEPCK活性。
自备仪器用品:
台式离心机、紫外分光光度计、1ml石英比色皿、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制:
提取液 60ml×1瓶, 4℃保存
试剂一 45ml×1瓶,4℃保存
试剂二 液体 41μl×1瓶,4℃保存
试剂三 粉剂×1支,-20℃保存
试剂四 粉剂×1 支,-20℃保存
工作液的配置:临用前将试剂二和试剂三转移到试剂一中混合溶解待用;用不完的试剂 4℃保存一周。
试剂四的配制:临用前加入2.5ml蒸馏水充分溶解待用;用不完的试剂4℃保存一周
样品前处理:
样本提取详见试剂盒内说明书。测定细菌、组织和细胞时需要测定蛋白浓度。可用总蛋白定量测试盒(考马斯亮蓝法)或者总蛋白定量测试盒(BCA 法)进行蛋白浓度的测定。
测定步骤:
试剂名称(μl)
测定管
样本
50
试剂四
工作液
900
将上述试剂按照顺序加入1ml石英比色皿中,立即混匀,加样本的同时开始计时,记录在 340nm 波长下的初始吸光度 A1和 1分钟后的吸光度 A2,计算△A=A1-A2