硫氧还蛋白氧化还原酶(TrxR)检测试剂盒 ; 50T/48样
测定原理:
TrxR催化NADPH还原DTNB生成TNB和NADP+,TNB在412nm有特征吸收峰,通过测定412nm波长处TNB的增加速率,即可计算TrxR活性。
自备实验用品及仪器:
可见分光光度计、低温离心机、可调节移液器、1ml 玻璃比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:液体×1瓶,4℃保存
试剂二:液体×1瓶,4℃避光保存。
试剂三:粉剂L×1瓶,4℃保存。临用前加入5ml 蒸馏水溶解。
粗酶液提取:
粗酶液提取详见说明书。测定组织和细胞同时需要测定蛋白浓度。可用总蛋白定量测试盒(考马斯亮蓝法)或者总蛋白定量测试盒(BCA法)进行蛋白浓度的测定。
TrxR测定操作:
1、分光光度计预热30min后,调节波长到412nm,用蒸馏水调零。
2、试剂一在 25℃(一般物种)或者 37℃(哺乳动物)预热 30min。
3、空白管:取1ml玻璃比色皿,加入100μl 试剂二,100μl 试剂三,800μl 试剂一,迅速混匀后于412nm测定10s和310s吸光度,记为A1和A2。△A 空白管=A2-A1。
4、测定管:取取1ml玻璃比色皿,加入100μl试剂二,100μl 试剂三,700μl 试剂一,100μl上清液,迅速混匀后于412nm测定10s和310s吸光度,记为A3和A4。A测定管=A4-A3。