糜蛋白酶检测试剂盒 ; 50管/24样
测定意义：
糜蛋白酶又称胰凝乳蛋白酶(Chymotrypsin),系从牛或猪胰中提取的一-种蛋白水解酶，具有肽链内切酶的作用，通过切断蛋白质肽链中酪氨酸、苯丙氨酸的羧端肽链作用，专- -水解羧端芳香族氨基酸(酪氨酸、色氨酸、亮氨酸)或侧键大体积疏水性残基甲硫氨酸等。可以分解炎症部位纤维蛋白的凝结物，促进血凝块、脓性分泌物及坏死组织的溶化分解，从而净化创面，使肉芽组织新生，促进伤口愈合。其在眼科、皮肤科做临床局部应用已被肯定，也可用于创口或局部炎症, 以减少局部分泌和水肿。近年来随着临床药理学研究的不断发展.其临床应用范围也日渐广泛。
测定原理：
以酪蛋白为底物，糜蛋白酶可水解蛋白产生含酚的氨基酸，而酚试剂可被含酚的氨基酸还原成蓝色物质，通过比色可测定糜蛋白酶活力。
试剂盒组成与配制：
试剂一: 液体24mlX1瓶，4℃保存3个月。
试剂二: 液体6mlX2瓶，4℃保存1个月。
试剂三: 液体100mlX1瓶，4℃保存3个月。
试剂四: 液体9mlX2瓶，4℃避光保存2个月。
试剂五: 1mg/ml酪氨酸标准品贮备液1mlX1瓶，标准品稀释液20mlX1瓶，4℃保存 1 个月。50ug/m1标准应用液的配制:取1mg/ml标准品贮备液50u1用标准品稀释液稀释至1ml,即 1: 19 (体积比)稀释，充分混匀后，4℃保存10天以上。
试剂六: 匀浆介质60mlX2瓶，4℃保存1个月。
操作步骤：
粗酶液提取详见说明书。测定组织和细胞同时需要测定蛋白浓度。可用总蛋白定量测试盒（考马斯亮蓝法）或者总蛋白定量测试盒(BCA法)进行蛋白浓度的测定。
TrxR测定操作：
1、样本前处理:
组织样本: 准确称取组织重量，按重量(g) :体积(ml)=1:9 的比例，加入9倍体积的匀浆介质，冰水浴条件下机械匀浆，制成 10%的组织匀浆，2500转/分，离心10分钟，
取上清液进行预试后根据活力大小或直接进行检测或用匀浆介质进行适当稀释后测定。(预试结果请参考附录中的标准曲线)
2、样本及试剂在测试前均要平衡至室温(室温在20C以上可放置室温:室温在20C以下，可将试剂置于37C水浴中预温10分钟)。
3、操作表:
① 酶促反应:
| 测定管 | 对照管 |
样本(ml) | 0.04 | 0.04 |
37℃水浴预温 2分钟 |
试剂一(ml) | | 0.4 |
试剂二(ml) | | 0.20 |
充分混匀，37℃准确水浴 10分钟 |
试剂一(ml) | 0.4 | |
充分混匀，37℃水浴10分钟,3500 转/分离心10分钟，取上清 0.3ml 显色反应 |
② 显色反应:
| 空白管 | 标准管 | 测定管 | 对照管 |
标准品稀释液(ml) | 0.3 | | | |
50ug/ml标准应用液(ml) | | 0.3 | | |
上清(ml) | | | 0.3 | 0.3 |
试剂三(ml) | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 |
试剂四(ml) | 0.3 | 0.3 | 0.3 | 0.3 |
充分混匀，37℃水浴 20 分钟后取出，660nm,1cm 光茎，蒸馏水调零，比色 |
注：对照管因不同的样本之间有差距，所以要求每只样本都要做对照管，而标准管及空白管只需要 1－2只。
计算公式及举例：
组织中糜蛋白酶活力的计算
① 定义：每毫克组织蛋白 37℃每分钟分解蛋白生成 1ug 氨基酸相当于 1 个酶活力单位(1 个酶活力单位＝1ug 酪氨酸/分钟/组织蛋白)。
② 计算公式
糜蛋白酶活力＝测定OD值-对照OD值 X 标准品浓度 ÷反应时间X反应液总体积(0.64ml)÷待测样本蛋白浓度(U/mgprot)＝标准OD值-空白OD值X(50ug /ml)÷(10min)X 取样量(0.04ml ) ÷ (mgprot/ ml)。
