内源性硫化氢(H2S)检测试剂盒 ; 50管/48样
测定原理:
H2S与醋酸锌、N, N-二甲基对苯二胺和硫酸铁铵等反应生成亚甲基蓝,亚甲基蓝在 665nm处有最大吸收峰,通过测定其吸光值可计算H2S含量。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1ml玻璃比色皿、研钵、浓硫酸和蒸馏水。
试剂组成:
提取液:液体50ml×1瓶,4℃保存;
试剂一:液体50ml×1瓶,4℃保存;
试剂二:液体32ml×1瓶,4℃保存;
试剂三:液体16ml×1瓶,4℃避光保存;
试剂四:液体16ml×1瓶,4℃保存;
试剂五:液体2.5ml×1瓶,4℃避光保存。
需自备试剂于仪器:
天平、低温离心机、可见分光光度计、1 ml玻璃比色皿、蒸馏水。
样本前处理:
样本前处理详见试剂盒内说明书。测定细菌、组织和细胞时需要测定蛋白浓度。可用总蛋白定量测试盒(考马斯亮蓝法)或者总蛋白定量测试盒(BCA 法)进行蛋白浓度的测定。
检测步骤:
试剂
空白
测定
样品(ml)
0.6
蒸馏水(ml)
试剂一(ml)
充分震荡混匀
试剂二(ml)
10000g ,4℃,离心 10min,去上清,留沉淀
0.3
试剂三(ml)
试剂四(ml)
10000g ,4℃,离心10min,取上清0.8ml加入试管中
试剂五(ml)
0.04
混匀,室温静置 5min,波长 665nm,1ml 玻璃比色皿,空白管调零,测定各管在665n下吸光度值(A665),记为A测定和 A空白,ΔA=A测定-A空白