柠檬酸合成酶(CS)检测试剂盒/50T
试剂组成及配制:
(一)、前处理试剂:
提取液 20mL×1瓶,4℃保存。
冲洗液 50mL×1瓶,4℃保存。
(二)、反应试剂:
试剂一:4mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:0.6mL×1支,-20℃避光保存。
试剂三:0.6mL×1支,-20℃避光保存。
试剂四:0.2mL×1支,4℃避光保存。
提取液 50mL×1瓶,4℃保存。
冲洗液 100mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:10mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:1.4mL×1支,-20℃避光保存。
试剂三:1.4mL×1支,-20℃避光保存。
试剂四:0.5mL×1支,4℃避光保存。
试剂盒存放:
本试剂盒收到后按规定条件存放,有效期6个月。
操作步骤:
1、样本前处理:样本处理详见说明书或本公司官网-技术文章部分关于样本处理的说明。测定组织和细胞同时需要测定蛋白浓度。可用总蛋白定量测试盒(考马斯亮蓝法)或者总蛋白定量测试盒(BCA法)进行蛋白浓度的测定。
2、操作步骤:(96孔板操作):(试剂盒附赠96孔板1块)
阴性对照孔
待测样本孔
试剂一(μ l)
190
试剂二(μl)
25
试剂三(μl)
轻摇混匀,37℃孵育箱温浴3~5min
试剂四(μl)
10
待测样本(μl)
充分混匀(或96孔板以震荡混匀),并置于酶标仪中,波长412nm,测定初始吸光度 A0 值;转入37℃孵育箱(或者在 37℃水浴箱)
计算公式:
注: 1、AU代表测定孔吸光度值,AO代表空白孔吸光度值。
2、微摩尔消光系数为13.6×10-3;0.6cm为光径换算结果;15分钟为反应时间。
3、体系稀释倍数即为待测样本占反应液总量的比值。