羟脯氨酸(Hyp)检测试剂盒 ; 50管/48样
测定原理:
羟脯氨酸在氧化剂的作用下所产生的氧化产物与二甲氨基苯甲醛作用呈现紫红色,根据其呈色的深浅可推算出其含量。
试剂盒组成与配制:
试剂一:粉剂×1瓶,甲液10ml×1瓶,乙液20ml×1瓶,临用时将粉剂先加甲10ml充分溶解(从瓶口向内看,完全溶解完)。然后再加乙液20ml充分混匀。配好后的试剂 4℃~8℃冰箱保存3个月有效。
试剂二:液体30ml×1瓶,4℃冰箱避光保存3个月有效。
试剂三:粉剂×1瓶,溶剂30ml×1瓶,临用时将粉剂一支加到30ml溶剂中充分溶解,配好后 4℃冰箱避光保存1个月有效。
试剂四:标准品5mg×3支,4℃冰箱保存6个月。100µg/ml标准贮备液的配制:测试前将一支标准品用双蒸水溶解后定容至50ml,4℃冰箱保存2周。5µg/ml标准应用液的配制:取100µg/ml标准贮备液1ml加双蒸水定容至20ml,现用现配。
羟脯氨酸的测定:
(一)、样本前处理试剂(4℃保存):(50T)
1、水解液60ml×1瓶
2、指示剂5ml×1瓶
3、调整PH甲液60ml×1瓶
4、PH调整乙液 30ml×1瓶
5、活性炭×1袋
(二)、样本前处理:
1、样本水解:
①、血清(浆):取0.5ml血清(浆)准确加水解液1ml,混匀。放试管中加盖后,
95℃或者沸水浴水解20分钟。
②、尿液(培养液):取1.0ml尿液(培养液)准确加水解液1ml,混匀。放试管中加盖后,95℃或者沸水浴水解20分钟。
③、组织:精确称取组织湿重 30~100mg放入试管中,准确加水解液1ml,混匀。加盖后 95℃或者沸水浴水解20分钟(水解10分钟时混匀一次,目的是使水解更充分)。
2、调PH值至6.0~6.8左右
①、将各试管流水冷却后各管加指示剂10μl,摇匀;
②、各管准确加入调PH甲液1.0ml,混匀(此时溶液应为红色);
③、用200μl的加样器吸取调PH的乙液向各管内逐滴小心加入调PH的乙液,每滴加入后均要混匀*,直至液体中指示剂的颜色变成黄绿色**(亦即红色消失时)。此时PH值在6.0~6.8左右(约加入调PH乙液100μl~500μl左右);*加调PH乙液时,每加一滴均要混匀,为防止液体外溢,如果没有带盖的玻璃磨口试管,可用普通玻璃试管代替,每次混匀时可用塑料薄膜或冰箱保鲜膜压住试管口,充分旋涡混匀即可。
**若您的样本是细胞培养液,因其中含有酚红,所以液体中的混合指示剂在PH为 6.0~6.8 左右时为橙黄红色,而不是黄绿色。
④、然后加双蒸水至10ml,混匀;
⑤、取 3~4ml 稀释的水解液加适量活性炭(约20~30mg左右,以上清液离心后澄清无色为准),混匀,3500转/分离心10分钟,小心取上清1ml作检测。
(三)、操作表:
| 空白管 | 标准管 | 测定管 |
双蒸水(ml) | 1.0 | | |
5µg/ml标准应用液(ml) | | 1.0 | |
检测液(ml) | | | 1.0 |
试剂一(ml) | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
混匀,静置 5 分钟 |
试剂二(ml) | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
混匀,37℃准确反应10分钟 |
试剂三(ml) | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
混匀,60℃水浴15分钟,冷却后,3500转/分离心10分钟,取上清于波长550nm,1cm光径,双蒸水调零,测定各管吸光度值。 |
计算公式:
(一)、血清(浆)计算公式:
1、计算公式:

(二)、尿液的计算公式:
1、计算公式:

(二)、组织的计算公式:
