羟自由基(OH.-)检测试剂盒 ; 50管/48样
测定原理：
Fenton反应是最常见的产生羟自由基的化学反应，H2O2 的量和 Fenton反应产生的OH·量成正比，当给予电子受体后，用 griess试剂显色，形成红色物质，其呈色与 OH·的多少成正比关系。
试剂组成与配制：
试剂一：3%H2O2标准品贮备液0. 5 ml×1支，4℃保存 3个月。0.03％标准品应用液的配制：3%H2O2标准贮备液 ∶双蒸水= 1∶99稀释，现用现配。
试剂二：底物贮备液 1ml×1支，4 ℃保存3个月。
底物应用液的配制：
①、若您的样本为抑制羟自由基，即测定管吸光度比对照管吸光度低，则底物应用液的配制：底物贮备液 ∶双蒸水= 1∶99 稀释，现用现配。
②、若您的样本为产生羟自由基，即测定管吸光度比对照管吸光度高，则底物应用液的配制：底物贮备液 ∶双蒸水= 1∶299稀释，现用现配。
试剂三：甲液贮备液2 ml× 1 支，4 ℃保存 3个月，用时加双蒸水1∶9 稀释成应用液。乙液7 ml×2支， 4 ℃保存3个月。
试剂三应用液的配制：甲液应用液与乙液等比例混合，用多少配多少，余下4 ℃保存。
试剂四：液体 10ml×1瓶，4 ℃保存3个月。用时加双蒸水稀释至100ml，制备成应用液， 4 ℃保存。若有结晶，则放置 37℃水浴至全部溶解后再稀释。
试剂五：液体 30ml×1瓶，避光 4℃冰箱保存3个月。
试剂六：液体 30ml×1瓶，避光 4℃冰箱保存3个月。
试剂七：分析纯的冰乙酸（冰醋酸） 自备。
显色剂的配制：试剂四应用液 ∶试剂五 ∶试剂六 ∶冰乙酸= 8 ∶ 3 ∶ 3 ∶ 2 , 现用现配。
[注]： 抑制羟自由基的物质如：血清（浆）、各种组织匀浆液、口服液等；产生羟自由基的物质如：中性白细胞、某些药物、部分植物等。
操作步骤：
以上配制好的应用液，先在37℃水浴中预温3分种，以下操作在37℃水浴中进行。
| 空白管 | 标准管 | 对照管 | 测定管 |
双蒸水( ml） | 0.4 | 0.2 | 0.2 | |
0.03% H2O2标准应用液( ml） | | 0.2 | | |
底物应用液( ml） | | | 0.2 | 0.2 |
样本*( ml） | | | | |
试剂三应用液( ml） | 0.4 | 0.4 | 0.4 | 0.4 |
混匀，37℃反应 1 分钟（准确以秒表计时），从加完试剂三开始到一分钟结束，立即加入显色剂终止反应，一次只能做一只管子。 |
显色剂( ml） | 2 | 2 | 2 | 2 |
混匀，室温放置 20 分钟后， 1 cm光径， 550nm ，双蒸水调零，测各管吸光度值。 |
* ：参考取样量：血清（浆）样本用生理盐水20倍稀释后取0.2ml作检测；若您有精确微量移液器，可直接取0.010ml血清（浆），再加0.190ml生理盐水。组织匀浆上清，取样0.2ml检测。具体取样量需根据预试结果确定，详细预试方法见附录。
注意点：
1、必须每一只管子单独做，并且反应时间一分钟一定要准确。
2、必须严格按照操作表顺序加试剂，不可配制混合试剂。
3、检测样本溶剂或介质可为生理盐水、双蒸水、醋酸、无水乙醇，但不能为磷酸缓冲液。
4、此法检测灵敏度较高，检测血清（浆）和组织以外样本时，最好先取原液及不同浓度
稀释后的样本,例如5倍稀释液或10倍稀释液做预试。如测定管颜色太浅可将样本用其溶剂继续稀释至颜色较深为止。我所曾检测花粉的水提液的羟自由基，将其原液稀释150倍后，显色较好。
