氢-钾ATP酶(H+、K+-ATPase)检测试剂盒 ; 200管/96样
测定原理：
ATP酶可分解ATP生成 ADP及无机磷，测定无机磷的量可判断ATP酶活力的高低。H＋K＋-ATP酶是一种能被钾专一激活而不被乌本苷抑制的 ATP酶。
试剂组成与配制：
组份
100管/48样
200管/96样
保 存
试剂一
液体
10ml×2瓶
10ml×3瓶
4℃保存
试剂二
7ml×1瓶
7ml×2瓶
试剂三
8ml×1瓶
8ml×2瓶
试剂四
粉剂
粉剂×2支
粉剂×4支
-20℃保存
试剂四的配制：用时每支试剂四粉剂加双蒸水至 5ml，现用现配，余下的-20℃以下可保存 1 周。
试剂五
试剂五的配制：用时每支试剂五粉剂加双蒸水至 5ml，适当加热溶解，4℃保存。
试剂六
3ml×1支
3ml×2支
试剂七
10ml×1支
10ml×2支
试剂七的配制：用时每支试剂七液体加双蒸水至 25ml，室温保存。
试剂八
粉剂×3瓶
粉剂×5瓶
试剂八的配制：用时每瓶试剂八加双蒸水至 40ml 溶解，溶解后 4℃可保存一周。
试剂九
粉剂×1瓶
粉剂×2瓶
试剂九的配制：用时每瓶试剂九粉剂加双蒸水至 100ml 溶解，室温保存。
试剂十
100ml×1瓶
100ml×2瓶
室温保存
试剂十一
10mmol标准品贮备液
10ml×1瓶
0.5μmol/ml 标准液的配制：用时按 10mmol/L 标准贮备液：双蒸水＝1 : 19 的比例配制，即取 0.5ml加双蒸水定容至 10ml。
定磷剂的配制：按双蒸水 : 试剂十 : 试剂八 : 试剂九=2 : 1 : 1 : 1 的比例配制。配好的定磷剂应为浅黄色，若无色则试剂无效，若蓝色则为磷污染，定磷剂需现用现配。
样本前处理：
准确称取组织重量，按重量（g）：体积（ml）=1：9的比例，加入9倍体积的生理盐水，冰水浴条件下制备成10%的组织匀浆液,2500转/分，离心10分钟，取上清液待测。
操作步骤：
1、酶促反应：
对照管
测定管
试剂一(μ l）
130
试剂二(μl）
80
试剂三(μl）
120
试剂四(μl）
40
试剂五(μl）
试剂六(μl）
样 本(μl）
100
混匀 37℃水浴10 分钟
试剂七(μl）
50
混匀 3500转/分，离心10分钟，取上清400μl上清定磷
2、定磷 ：
管号
标准管
0.5μmol/ml标准应用液(μl）
400
对照管的上清液(μl）
测定管的上清液(μl）
定磷剂(μl）
2000
混匀，45℃水浴5分钟，冷却至室温，660nm处，1cm光径，双蒸水调零，测各管吸光度值。
计算公式：
1、单位定义：规定每小时每毫克组织蛋白的ATP酶分解ATP产生1μmol 无机磷的量为一个ATP酶活力单位，即微摩尔磷/毫克蛋白/小时( μmolPi/mgprot/hour)。
2、计算公式：
（蛋白浓度可通过用本所的 A045-2-1总蛋白定量考马斯亮蓝法试剂盒测定）
