溶菌酶(LZM)检测试剂盒 ; 30管/28样
本所比浊法测定溶菌酶活性主要有三种：
1、自身对照法：适用于样本数量较少，或者样本有混浊或有颜色（如血液红色）；
2、空白对照法：适用于样本量多且样本比较澄清；
3、标准曲线法。
测定原理：
在一定浓度的混浊菌液中，由于溶菌酶能水解细菌细胞壁上肽聚糖使细菌裂解而浓度降低，透光度增强，故可以根据透光度变化来推测溶菌酶的含量。
试剂组成及配制：
1、试剂组成：
试剂一：菌粉，5mg×4支，2～8℃干燥保存，有效期6个月。
试剂二：菌粉溶剂，100ml×1瓶，2～8℃保存，并每月放微波炉中温消毒20秒，有效期6个月。
试剂三：标准品，粉剂 2mg×1支（活力为8万单位/mg），2～8℃干燥保存，有效期6个月。
[注]：试剂盒严格按照上述方法保存有效期可延至一年。
2、试剂配制：
(1)、贮备菌液的配制：
取5mg/支的菌粉1支，倒入匀浆管中，加菌粉溶剂1ml，轻轻缓慢上下旋转研磨3分钟（切勿溅出），即为贮备菌液，将其取出后置 2～8℃冰箱密封保存一周左右。
(2)、应用菌液的配制：
按贮备菌液:菌粉溶剂=1:19进行配制，需多少配多少。剩下的应用菌液2～8℃可保存一周左右。最好是现用现配，用时摇匀。
(3)、标准品的配制：
①、标准品贮备液的配制：
每支准确加双蒸水1.0ml配成2mg/ml的标准品贮备液。2～8℃可保存7～10天。
②、标准品应用液的配制：
临用时按标准品贮备液∶双蒸水=1∶799比例稀释成2.5µg/ml（即200U/ml）的标准品应用液，需多少配多少。2～8℃保存，可保存7～10天。
[注]：本法用分光光度计 530nm处,1cm光径比色皿测得是样本或标准的透光度值
操作步骤：
①、将配制好的应用菌液，标准应用液及所需检测的样本均放入37℃水浴箱中预温5分钟以上。使菌液，标准液及检测样本的温度达到 37℃。
②、将可见分光光度计于 530nm处,1cm光径比色皿, 以双蒸水调透光度100% (比色皿准备两只,一只用于调透光度100%,一只用于测定)。
③、往相应编号的试管中加入0.2ml待测样本，取2ml应用菌液迅速冲入试管中，立即混匀并计时。(标准品应用液取0.2ml,加入2ml应用菌液,其它操作与测定相同)
④、迅速倒入比色皿中在可见分光光度计 530nm处比浊，5秒时读取透光度值T0, 比色皿不要取出，在2分 5秒时读取透光度值 T2；
[注]：如5秒时来不及读数，可20秒时读取调透光度值T0,在2分20秒时读取透光度值T2，标准管需同样操作。
⑤、求出2次透光度的差值(△T= T2-T0）。
[注]：用同一比色皿每检测一个样本后均要用双蒸水冲洗干净，才可再放第二个样本或标准品应用液。
计算公式：
[注]：本法用分光光度计530nm处,1cm光径比色皿测得是样本或标准的透光度值
1、操作表：(操作最好在冰水浴中进行）：
[注]：冰水浴即自来水中加几块冰。
| 空白管 | 标准管 | 测定管 |
双蒸水(ml） | 0.2 | | |
2.5µg/ml溶菌酶标准应用液(ml） | | 0.2 | |
样本(血清、尿、稀释的唾液等）ml） | | | 0.2 |
应用菌液(ml） | 2.0 | 2.0 | 2.0 |
混匀，37℃准确水浴15分钟，立即取出置于0℃以下的冰水浴中3分钟，逐管取出 |
倒入1cm光径比色皿中，530nm处以双蒸水调透光度100%，比色，测各管透光度T15（T15即37℃水浴15分钟后的透光度值）。
[注1] ：比色时可能在比色皿表面有水雾形成，请将比色皿擦干净后再比色。
[注2] ：测试过程中为消除每只测定管之相互间的干扰，所以必须在每支管子测定前将比色皿用双蒸水冲洗干净。
[注3] ：OT15为水浴 15分钟后的空白管透光度，UT15为水浴15分钟后测定管的透光度，ST15为水浴15分钟后标准管的透光度。
计算公式：
1、标准曲线的制备：
①、标准液的配制：
将标准品2mg 准确加双蒸水1.0 ml，混匀，配成160000 U/ml的标准品贮备液，再取适量的标准品贮备液，用双蒸水分别稀释成 2000 U/ml、1000 U/ml、500 U/ml、250 U/ml、125U/ml、62.5U/ml、31.25 U/ml、 15.625 U/ml 的不同浓度的标准液。
②、将应用菌液及各种浓度的溶菌酶标准液置于 0℃的冰水中预冷5分钟以上。
③、按下表进行操作：(操作最好在冰水浴中进行）
| 空白管 | 测定管 |
双蒸水(ml） | 0.2 | |
不同浓度标准液(ml） | | 0.2 |
应用菌液(ml） | 2.0 | 2.0 |
37℃准确水浴15分钟，立即取出置于0℃以下的冰水浴中3分钟，逐管取出，倒入1cm光径比色皿中，530nm处，双蒸水调透光度100%，比色，测各管透光度T15（T15即37℃水浴15分钟后的透光度值）。 |
作坐标图：
1、以各标准管的单位浓度为横坐标，以各管透光度差值为纵坐标作图。
2、按方法二进行测定然后查标准曲线（但不如计算公式方便）
[注]：因试剂盒内带有标准品，每次只需做1～2只标准管即可以，一般不需要作标准曲线。
