超微量Na+K+–ATP酶检测试剂盒 ; 100管/50样
(测红细胞)
测定原理：
ATP酶可分解ATP生成 ADP及无机磷，测定无机磷的量可判断ATP酶活力的高低。
试剂组成与配制：
| 组份 | | | 保存 |
试剂一 | 液体 | 13ml×1瓶 | 13ml×2瓶 | 4℃保存 6个月 |
试剂二 | 液体 | 4ml×1瓶 | 4ml×2瓶 | 4℃保存 6个月 |
试剂三 | 粉剂 | 粉剂×4支 | 粉剂×8支 | -20℃保存 6个月 |
试剂三的配制：用时每支试剂三粉剂加双蒸水 1ml，充分溶解。（用不完-20℃以下可保存一周。） |
试剂四 | 液体 | 5ml×1瓶 | 5ml×2瓶 | 4℃保存 6个月 |
试剂五 | 甲液 | 7ml×4瓶 | 7ml×8瓶 | 4℃保存 6个月 |
| 乙液 | 6ml×4瓶 | 6ml×8瓶 | 4℃避光保存 6个月 |
[注]：试剂五乙液在冬天或 4℃长时间保存时可能会出现凝胶状物质，37℃溶解不了，可将其60℃左右水浴 10 分钟即可完全溶解；甲液、乙液应防止磷污染。 |
试剂六 | 液体 | 50ml×1瓶 | 50ml×2瓶 | 室温保存 6个月 |
试剂七 | 10mmol/L 标准磷贮备液 | 5ml×1瓶 | 5ml×1瓶 | 4℃保存 6个月 |
试剂十 | 贮备液 | 0.1ml×2支 | 0.1ml×4支 | 4℃保存 6个月 |
| 稀释液 | 0.9ml×2支 | 0.9ml×4支 | 4℃保存 6个月 |
试剂十的配制：取一支试剂十稀释液加入一支试剂十贮备液中，用不完的 4℃保存。 |
双蒸水 | 40ml×1瓶 | 40ml×1瓶 | 4℃或室温保存 |
0.1μmol/ml 标准磷应用液的配制：用时将 10mmol/L 磷贮备液 100 倍稀释，即取 0.1ml 加双蒸水至 10ml。 |
0.02μmol/ml 磷标准液的配制：用时将 0.1 μmol/ml 磷标准液用双蒸水 5 倍稀释，即取 0.1μmol/ml磷标准液 1ml 加双蒸水 4ml。 |
基质液的配制：按试剂一 ︰试剂二︰试剂三=260︰ 80︰ 80 比例混合。需多少配多少，现用现配。 |
显色剂的配制：用时取一瓶试剂五甲液加入一瓶已预温好试剂五乙液中，充分混匀，需提前 0.5小时配制，2～8℃条件下至少可保存5天，配好的显色剂的量够做13个管子（如果你的样本量很少，所需的显色剂的量较少，那么你可以按试剂五中的甲液︰乙液=7︰ 6 的比例自行配制显色剂，需多少配多少（按比例配制显色剂时要防止磷污染，最好用专用吸嘴）。 |
样本前处理：
样本处理详见说明书或本公司官网-技术文章部分关于样本处理的说明。
操作步骤：
1、样本前处理：详见红细胞前处理中溶血液的制备
2、酶促反应：
| 对照管 | Na+k+-ATPase 测定管 |
双蒸水(ml） | 0.16 | 0.1 |
样本(ml） | | 0.1 |
试剂十(ml） | | 0.06 |
试剂一(ml） | 0.26 | 0.26 |
试剂二(ml） | 0.08 | 0.08 |
试剂三(ml） | 0.08 | 0.08 |
混匀，37℃准确反应10 分钟， |
试剂四(ml） | 0.1 | 0.1 |
样本(ml） | 0.1 | |
混匀，3500转/分，离心 10分钟，取上清定磷 |
3、定磷：(0.02 μmol/ml 磷标准液 配制见第一页）
| 空白管 | 标准管 | 对照管 | Na+k+-ATPase测定管 |
双蒸水(ml） | 0.3 | | | |
0.02μmol/ml磷标准液(ml） | | 0.3 | | |
上清液(ml） | | | 0.3 | 0.3 |
试剂五显色剂(ml） | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 |
混匀，室温静止2分钟 |
试剂六(ml） | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 |
混匀，室温静置5分钟，在636nm 处，1cm光径，双蒸水调零，测各管吸光度值。 |
[注]：在比色前，将比色皿用自来水冲洗10余次，再用双蒸水冲洗4～5次，以免磷污染。
全血中ATPase的计算：
1、按红细胞数计算：
①、定义：规定每小时每107个红细胞中ATP酶分解 ATP产生1µmol无机磷的量为一个ATP酶活力单位。即微摩尔磷/107红细胞/小时(µmolPi/107个 RBC/hour）。
②、计算公式：
[注]：6*：定义上为每小时，实际操作为10分钟反应，所以必须乘以 6。 7.8**：反应体系中7.8倍稀释。
2、按全血体积计算：
①、定义：规定每小时每毫升全血中ATP酶分解ATP产生1µmol无机磷的量为一个ATP酶活力单位。即微摩尔磷/毫升/小时(µmolPi/ml/hour）。
②、计算公式：
[注]：6*：定义上为每小时，实际操作为10分钟反应，所以必须乘以6。7.8**：反应体系中7.8倍稀释。
3、按血红蛋白量计算：
①、定义：规定每小时每克血红蛋白相当的红细胞中ATP酶分解ATP产生 1µmol无机磷的量为一个ATP酶活力单位。即微摩尔磷/克血红蛋白/小时(µmolPi/gHb/hour）。
②、计算公式：
[注]：6*：定义上为每小时，实际操作为10分钟反应，所以必须乘以6。7.8**：反应体系中 7.8 倍稀释。
