超微量Na+K+–ATP酶检测试剂盒/25样
(测组织、普通细胞)
测定原理：
ATP酶可分解ATP生成 ADP及无机磷，测定无机磷的量可判断ATP酶活力的高低。
试剂组成与配制：
组份
保存
试剂一
液体
13ml×1瓶
13ml×2瓶
4℃保存 6个月
试剂二
4ml×1瓶
4ml×2瓶
试剂三
粉剂
粉剂×4支
粉剂×8支
-20℃保存 6个月
试剂三的配制：用时每支试剂三粉剂加双蒸水1ml，充分溶解。（用不完-20℃以下可保存一周。）
试剂四
5ml×1瓶
5ml×2瓶
试剂五
甲液
7ml×4瓶
7ml×8瓶
乙液
6ml×4瓶
6ml×8瓶
4℃避光保存 6个月
[注]：试剂五乙液在冬天或 4℃长时间保存时可能会出现凝胶状物质，37℃溶解不了，可将其60℃左右水浴 10 分钟即可完全溶解；甲液、乙液应防止磷污染。
试剂六
50ml×1瓶
50ml×2瓶
室温保存 6个月
试剂七
10mmol/L 标准磷贮备液
试剂十
贮备液
0.1ml×2支
0.1ml×4支
稀释液
0.9ml×2支
0.9ml×4支
试剂十的配制：取一支试剂十稀释液加入一支试剂十贮备液中，用不完的 4℃保存。
双蒸水
40ml×1瓶
4℃或室温保存
0.1μmol/ml 标准磷应用液的配制：用时将 10mmol/L 磷贮备液 100 倍稀释，即取 0.1ml 加双蒸水至 10ml。
0.02μmol/ml 磷标准液的配制：用时将 0.1 μmol/ml 磷标准液用双蒸水 5 倍稀释，即取 0.1μmol/ml磷标准液 1ml 加双蒸水 4ml。
基质液的配制：按试剂一 ︰试剂二︰试剂三=260︰ 80︰ 80 比例混合。需多少配多少，现用现配。
显色剂的配制：用时取一瓶试剂五甲液加入一瓶已预温好试剂五乙液中，充分混匀，需提前 0.5小时配制，2～8℃条件下至少可保存5天，配好的显色剂的量够做13个管子（如果你的样本量很少，所需的显色剂的量较少，那么你可以按试剂五中的甲液︰乙液=7︰ 6 的比例自行配制显色剂，需多少配多少（按比例配制显色剂时要防止磷污染，最好用专用吸嘴）。
样本前处理：
样本处理详见说明书或本公司官网-技术文章部分关于样本处理的说明。测定组织和细胞同时需要测定蛋白浓度。可用总蛋白定量测试盒（考马斯亮蓝法）或者总蛋白定量测试盒(BCA法)进行蛋白浓度的测定。
操作步骤：
1、酶促反应：
对照管
Na+k+-ATPase 测定管
双蒸水(ml）
0.16
0.12
样本(ml）
0.1
试剂十(ml）
0.04
试剂一(ml）
0.26
试剂二(ml）
0.08
试剂三(ml）
混匀，37℃准确反应10 分钟，
试剂四(ml）
混匀，3500转/分，离心10分钟，取上清定磷
2、定磷：(0.02μmol/ml磷标准液 配制见第一页）
空白管
标准管
Na+k+-ATPase测定管
0.3
0.02μmol/ml磷标准液(ml）
上清液(ml）
显色剂(ml）
1.0
混匀，室温静止2分钟
试剂六(ml）
混匀，室温静置5分钟，在636nm 处，1cm光径，双蒸水调零，测各管吸光度值。
[注]：在比色前，将比色皿用自来水冲洗10余次，再用双蒸水冲洗4～5次，以免磷污染。
计算公式及举例：
1、定义：规定每小时每毫克组织蛋白的组织中ATP酶分解ATP产生1µmol无机磷的量为一个ATP酶活力单位。即微摩尔磷/毫克蛋白/小时(µmolPi/mgprot/hour）。
2、计算公式：
[注]6*：定义上为每小时，实际操作为10分钟反应;7.8**：反应体系中7.8倍稀释。
